顕微鏡を用いた微生物の直接計数法
血球計数器を使用して顕微鏡下で微生物を直接計数することは、微生物を計数するために一般的に使用される方法です。この方法の利点は、その直観性とスピードです。適切に希釈した細菌懸濁液 (または胞子懸濁液) を血球計数器のスライドとカバー スライドの間の計数チャンバーに置き、顕微鏡下で計数します。計数室の容積は一定（0.1mm2）であるため、単位容積あたりの微生物の総数は、顕微鏡で観察される微生物の数に基づいて換算できます。この方法は生菌細胞と死菌細胞の合計を計算するため、総細菌数法としても知られています。
血球計数プレートは通常、3 つのプラットフォームを形成する 4 つの溝を持つ特別に設計されたスライドガラスです。中央のプラットフォームは短い横溝によって半分に分割されており、プラットフォームの各側面には格子が刻まれています。各グリッドは 9 つの大きな正方形に分割されており、中央の大きな正方形は微生物の計数が行われる計数室です。血球計数プレートの構造を図 VIII-1 に示します。
計数室の規模には大きく分けて2つの仕様があります。 1 つは、大きな正方形が 16 個の中央の正方形に分割され、各中央の正方形がさらに 25 個の小さな正方形に分割されることです (図 VIII -2)。別の方法は、大きな正方形を 25 個の中央の正方形に分割し、各中央の正方形をさらに 16 個の小さな正方形に分割することです (図 VIII -1、C)。ただし、計数盤のサイズに関係なく、図 VIII-2 に示すように、各大きな正方形内の小さな正方形の数は同じです。つまり、16 × 25=400 個の小さな正方形です。
大正方形の一辺の長さが 1mm の場合、大正方形の面積は 1mm2 となります。カバーガラスで覆った後のスライドとカバーガラスの間の高さは0.1mmなので、計数室の体積は0.1mm3となります。
計数する場合、通常は5マス分の細菌の総数を数え、各マス目の平均値を求めます。これに 16 または 25 を掛けると、大きな正方形内の細菌の総数が得られ、これが細菌溶液 1 ml 中の細菌の総数に変換されます。
