レーザー走査型多光子顕微鏡の利点を強化
レーザー走査型多光子顕微鏡は、光学顕微鏡を大幅に改良したものです。生細胞、固定細胞、組織の深部構造を観察でき、鮮明で鮮明な多層 Z 平面構造、つまり光学断面を取得して、標本の 3 次元立体構造を構築できます。共焦点顕微鏡は、レーザー光源を使用します。レーザー光源は、拡大後に対物レンズの後焦点面全体を満たし、対物レンズのレンズ システムを通過して、標本の焦点面上の非常に小さな点に収束します。対物レンズの開口数に応じて、最も明るい照明点の直径は約 0.25 ~ 0.8μm、深さは約 0.5 ~ 1.5μm です。共焦点スポットのサイズは、顕微鏡の設計、レーザー波長、対物レンズの特性、走査ユニットの状態設定、標本の特性によって異なります。フィールド顕微鏡は照明範囲と深さが大きく、共焦点顕微鏡は焦点面上の焦点に焦点を合わせた焦点照明を備えています。 共焦点顕微鏡の最も基本的な利点は、厚い蛍光標本（5μm以上に達することもあります）の微細な光学切片を作成できることです。切片の厚さは約0.5〜1.5μmです。顕微鏡のZ軸ステッピングモーターを使用して標本を上下に移動することで、一連の光学切片画像を取得できます。画像情報の取得は平面内で制御され、標本上の他の場所から放出される信号によって干渉されることはありません。背景蛍光の影響を取り除き、信号対雑音比を高めた後、共焦点画像のコントラストと解像度は、従来のフィールド照明蛍光画像と比較して大幅に向上します。多くの標本では、多くの複雑な構造コンポーネントが絡み合って複雑なシステムを形成していますが、十分な光学切片を収集できれば、ソフトウェアを使用して3次元で再構築できます。この実験方法は、細胞または組織間の複雑な構造と機能の関係を解明するために生物学研究で広く使用されています。
