蛍光顕微鏡の原理応用と使い方
(1) 蛍光顕微鏡の原理と構造的特徴：蛍光顕微鏡は、発光効率の高い点光源を使用し、フィルターシステムを通して特定の波長の光（紫外光 3650 インチや紫青色光 4200 インチなど）を放射します。試料を励起する励起光として。 内部の蛍光体がさまざまな色の蛍光を発した後、対物レンズと接眼レンズを拡大して観察します。 このように、強いコントラストの背景の下では、蛍光が非常に弱い場合でも、識別が容易であり、感度が高くなります。 主に細胞の構造と機能、化学組成の研究に使用されます。 蛍光顕微鏡の基本構成は、通常の光学顕微鏡にいくつかの付属品（蛍光光源、励起フィルター、2色ビームスプリッター、ブロッキングフィルターなど）を加えたものです。 蛍光光源 - 通常、さまざまな波長の光を放射できる超高圧水銀ランプ（50-200W）が使用されますが、各蛍光物質には最も強い蛍光を発する励起波長があるため、励起フィルター（一般的には、紫外、紫、青、緑の励起フィルターがあります)。特定の波長の励起光のみを通過させて試料に照射し、他の光を吸収します。 各物質は励起光を照射されると、ごく短時間のうちに照射波長よりも長波長の可視蛍光を発します。 蛍光は特異的であり、一般に励起光よりも弱いです。 特定の蛍光を観察するには、対物レンズの後ろに遮断（または抑制）フィルターが必要です。 これには 2 つの機能があります。1 つは、蛍光を妨げて目に損傷を与えないように、接眼レンズに入る励起光を吸収して遮断することです。 もう 1 つは、特定の蛍光を選択して通過させ、特定の蛍光色を示すことです。 2 つのフィルターは一緒に使用する必要があります。
蛍光顕微鏡には、光路の観点から 2 つのタイプがあります。
1. 透過型蛍光顕微鏡：励起光源を集光レンズを通して試料材料に通し、蛍光を励起します。 一般的には暗視野コレクターが使用されますが、通常のコレクターを使用して、励起光の方向を変えて試料にバイパスするようにミラーを調整することもできます。 これは古い蛍光顕微鏡です。 低倍率で蛍光が強いのがメリットですが、倍率が上がると蛍光が弱くなるのがデメリットです。 したがって、より大きな試料材料を観察する方が良いでしょう。
2. 落射蛍光顕微鏡は、現代に開発された新しいタイプの蛍光顕微鏡です。 違いは、励起光が対物レンズから標本の表面に入射すること、つまり、照明コンデンサーと蛍光を収集するための対物レンズとして同じ対物レンズが使用されることです。 光ウランから 45 度離れた光路にダイクロイック ビーム スプリッターを追加する必要があります。 励起光は対物レンズに反射され、サンプル上に集光されます。 試料から発生した蛍光と対物レンズのレンズ面やカバーガラス面で反射した励起光は同時に対物レンズに入射し、2色ビームスプリッターに戻って励起光と蛍光を分離します。 、残留励起光はブロッキングフィルターによって吸収されます。 異なる励起フィルター/2色ビームスプリッター/ブロッキングフィルターの組み合わせに変更するなど、異なる蛍光反応生成物のニーズに対応できます。 この種の蛍光顕微鏡の利点は、視野の照明が均一で、画像が鮮明で、倍率が高くなるほど蛍光が強くなることです。
(2) 蛍光顕微鏡の使い方。
1. 光源をオンにすると、超高圧水銀ランプが最も明るい点に達するまで数分間ウォームアップする必要があります。
2. 透過型蛍光顕微鏡では、光源とコンデンサーの間に必要な励起フィルターを設置し、対物レンズの後ろに対応する遮断フィルターを設置する必要があります。 落射蛍光顕微鏡では、必要な励起フィルター/デュアルカラー ビーム スプリッター/ブロッキング フィルター インサートを光路のスロットに挿入する必要があります。
3. 低倍率レンズで観察し、さまざまなモデルの蛍光顕微鏡の調整装置に従って、光源の中心が照明スポット全体の中心に位置するように調整します。
4. 標本片を置き、焦点を合わせて観察します。 使用中に注意が必要です。目を傷つけないように、エンドフィルターで直接観察しないでください。 オイルレンズで標本を観察する場合は、蛍光を含まない特殊なオイルレンズを使用する必要があります。 高圧水銀ランプは消灯後、すぐに再点灯することはできないため、テストが必要です。 5分後に再起動できますが、再起動しないと不安定になり、水銀ランプの寿命に影響を与えます。
(3) 青紫光フィルターを備えた教育プラットフォーム上の蛍光顕微鏡下で、0.01 パーセントのアクリジン オレンジ蛍光色素で染色された細胞を観察します。 核と細胞質は励起されて、2 つの異なる色の蛍光 (暗緑色とオレンジがかった赤色) を生成します。
