蛍光顕微鏡のヒントとコツ
(i) スライド
スライドの厚さは 0.8 ～ 1.2 mm にする必要があります。厚すぎると、一方では光吸収が多くなり、他方では収集した標本に光を励起させることができません。スライドは滑らかで、厚さが均一で、明らかな自己蛍光がないものでなければなりません。石英ガラスのスライドが必要になる場合もあります。
(ii) カバーガラス
カバーガラスの厚さは約 0.17mm、きれいです。励起光を強化するために、カバーガラスに干渉させることもできます。これは、カバーガラスの表面に異なる波長の光の層を何層もメッキした特殊なもので、カバーガラスの干渉に異なる役割を果たします (フッ化マグネシウムなど)。これにより、滑らかな反射励起光を通じて蛍光を発することができ、反射励起光は標本を励起することができます。
（iii）標本
組織切片やその他の標本は厚すぎてはなりません。厚すぎると励起光が標本の下部でほとんど消費され、対物レンズで直接観察する標本の上部の励起が不十分になります。さらに、細胞が重なったり、不純物が隠れたりして、判定に影響します。
(D) シーリング剤
シーリング剤としてはグリセリンが一般的に使用されますが、自己蛍光がなく、無色透明でなければなりません。蛍光の明るさは pH 8.5 ~ 9.5 でより明るくなり、すぐに消えにくいです。そのため、シーリング剤としては、グリセリンと 0.5mol/lH9.0 ~ 9.5 の炭酸緩衝液を等量混合したものが一般的に使用されます。
（E）ミラーオイル
一般的な暗視野蛍光顕微鏡やオイルミラー標本観察では、ミラーオイルを使用する必要があります。専用の非蛍光ミラーオイルを使用するのが望ましいですが、前述のグリセロールの代わりに流動パラフィンを使用することもできますが、屈折率が低くなり、画像の品質に若干影響します。
