顕微鏡イメージング教室丨広視野蛍光顕微鏡
生細胞イメージング用途では、広視野蛍光顕微鏡により、顕微鏡ステージ上に配置された特定の環境チャンバー内で増殖した付着細胞の動態の観察が容易になります。 最も基本的な構成では、EPI 蛍光照明を備えた標準的な倒立組織培養顕微鏡に、エリア アレイ検出器システム (通常は CCD カメラ)、適切な蛍光フィルター、および有害な励起光への細胞の過度の曝露を制限するシャッター システムが結合されています。 。 基本的な蛍光顕微鏡法は、慎重に調整された干渉フィルターに依存して、発光の照明と検出のための特定の帯域幅を選択します。 光源には、水銀、キセノン、メタルハライドアークランプ、ビーム拡大レーザーシステム、発光ダイオード (LED) が含まれており、これらすべてに異なるフィルター仕様が必要です。 蛍光顕微鏡検査で使用される合成蛍光色素は、近紫外、可視、近赤外領域をカバーする発光スペクトルを持っています。 遺伝的にコードされた蛍光タンパク質の使用により、生細胞イメージングにおける蛍光顕微鏡の機能が大幅に拡張され、研究者が関心のある細胞内の領域を正確にターゲットできるようになりました。
Nuohai LS 18 は、Nuohai が独自に開発した新しいタイプのライトシート照明顕微鏡で、透明な大きな組織サンプルの高解像度 3D イメージング用に特別に設計されており、脳、脾臓、小腸などのさまざまな無傷の組織の探索に特化しています。 、腎臓、肺、心臓、腫瘍。 臓器の3D精密構造。
広視野蛍光では、顕微鏡の対物レンズによって収集される全開口発光により、必要な露光時間を最小限に抑えながら、記録される信号が最大になります。 したがって、非常に短い光期間でサンプルを画像化できます。 広視野イメージングの主な欠点は、バックグラウンド信号と同様に、焦点面から遠く離れた領域からの蛍光が、関心のある特徴を覆い隠すことが多い不要な光であることです。 したがって、対象となる特徴が大きい場合（細胞小器官など）、または点状の点が多い場合には、広視野イメージングが最良の結果をもたらします。 付着細胞、細菌、酵母、非常に薄い組織切片など、多種多様な生細胞サンプルは広視野蛍光イメージングの理想的な候補ですが、より高度なイメージング手法ではより厚い組織 (5 ミクロン以上) が最適です。
合成蛍光色素、量子ドット、蛍光タンパク質を使用した蛍光イメージングには多くの進歩がありましたが、場合によっては、蛍光と他のイメージングモダリティを組み合わせることが有用です。 一例として、DIC を広視野蛍光と組み合わせて使用すると、特定の標識ターゲットに関する関心のある現象を研究しながら、細胞の生存率と一般的な形態をモニタリングできます。 DIC と蛍光を 1 つの画像で取得することは通常は非現実的ですが、適切に構成された顕微鏡では 2 つの技術を連続して使用できます。 したがって、落射蛍光モードでイメージングした後、透過光を使用して蛍光標識サンプルから DIC 画像を取得できます。 2 つの画像は事後分析中に結合できます。 DIC 画像と蛍光画像の同時取得は、スペクトル分離された照明 (可視光と近赤外線など) およびデュアルカメラまたはスプリットビュー カメラ アダプターを使用する高度な広視野顕微鏡構成で可能です。 ほとんどのレーザー走査型共焦点顕微鏡では、蛍光モードと DIC モードの両方で同時に画像を取得できるため、取得後の処理が不要になります。 位相コントラストとホフマン変調コントラストは、広視野蛍光顕微鏡と組み合わせて使用することもできます。 ただし、これらの技術では、対物レンズが特殊であり、位相リングであろうとホフマン変調板であろうと、5-15 パーセントの発光強度の損失が発生します。
記事リンク: 計測機器ネットワーク https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
