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光学顕微鏡および電子顕微鏡サンプルの作製方法

Jan 30, 2024

光学顕微鏡および電子顕微鏡サンプルの作製方法

 

顕微鏡標本作製法には、一般的に、切片法、全標本法、塗抹法、錠剤法の 4 つのカテゴリがあります。


①スライス法。光学顕微鏡のスライス厚は2〜25ミクロンです。一般的に、動植物材料のスライス厚は約10ミクロンが適切です。 切片化方法は、包埋媒体によって異なります。一般的に使用されているのは、パラフィン切片法、綿コロイド切片法、凍結切片法、エチレングリコールメタクリレート法(GMA法と呼ばれる)です。 パラフィン切片法には、固定、包埋、切片化、染色、脱水、マウントなどの手順が含まれます。ポイントは、生物材料をパラフィンに包埋し、パラフィンを支持体として使用し、ワックスブロックに浸した生物材料を理想的な薄切片に切断することです。操作プロセスは次のとおりです。固定→水洗→低濃度から高濃度への段階的なアルコール脱水→キシレン透明化→ワックス浸漬→包埋→切片化→パッチ→キシレン脱ワックス→高濃度から低濃度への段階的なアルコール処理。 最終的には水→染色→低濃度アルコールから高濃度アルコールまで段階的に脱水→キシレンで透明化→樹脂糊で封印という工程に移行しますが、基本的な工程はどの製造技術でも同じです。


②インテグラルシール法。単一細胞、微小生物、分散器官のホールマウント標本作製法。この方法も固定、染色、脱水、透明化、マウントなどのさまざまな手順が必要です。ゾウリムシや昆虫の口器を作製するのにこの方法が使われます。


③塗抹法 拡散しやすい生物標本をスライドガラス上に塗抹する作製方法。血液塗抹標本がその一例。


④錠剤圧搾法。動物の精母細胞や根端細胞など、自然で分散しやすい組織、または加工後に分散しやすい組織をスライドガラスの上に置き、カバーガラスを追加し、力で組織を押しつぶして、内部の細胞または細胞構造を1層に広げる製造方法。圧搾法は染色体の観察によく使用され、通常はマゼンタ酢酸塩、リケンレッド、石炭酸フクシンで染色されます。

 

2 Electronic microscope

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