蛍光顕微鏡スライドの作製要件
(1) スライドガラス
スライドの厚さは 0.8 ～ 1.2 mm である必要があります。スライドが厚すぎると、一方ではより多くの光が吸収され、他方では励起光が標本上に集まらなくなります。スライド ガラスは滑らかで、厚さが均一で、明らかな自発蛍光があってはなりません。石英ガラスのスライドが必要になる場合もあります。
(2) カバーガラススライド
カバーガラスの厚さは約0.17mmで滑らかです。励起光を増強するために、干渉カバーガラスを使用することもできます。これは、異なる波長の光に対して異なる干渉効果を持つ物質 (フッ化マグネシウムなど) の複数の層を備えた特別に設計されたカバー ガラスです。蛍光をスムーズに通過させ、反射励起光で標本を励起することができます。
(3) 検体
組織切片やその他の標本は厚すぎてはいけません。厚すぎると、励起光の大部分が試料の下部で消費され、対物レンズで直接観察される上部は十分に励起されません。さらに、セルの重複や不純物のマスキングが判定に影響を与える可能性があります。
(4) シール剤
グリセリンは一般に封入剤として使用されますが、自発蛍光がなく、無色透明でなければなりません。蛍光輝度は pH 8.5-9.5 で比較的明るく、すぐに消えにくいです。したがって、グリセロールとpH 9.0-9.5の0.5mol/L炭酸緩衝液の等量混合物がシーリング剤として一般的に使用されます。
(5)ミラーオイル
暗視野蛍光顕微鏡や油顕微鏡で標本を観察する場合には、ミラーオイルを使用する必要があります。特殊な無蛍光ミラーオイルを使用することも、グリセリンの代替品として使用することもできます。流動パラフィンも使用できますが、屈折率が低く、画質への影響が若干あります。
