位相差顕微鏡を使用する際のいくつかの注意事項とヒント
位相差顕微鏡の使用
1) 位相コントラスト装置を取り付けます。通常の顕微鏡のコンデンサー レンズを取り外し、環状絞りを備えたコンデンサー レンズを対応する顕微鏡に取り付けます。 顕微鏡の通常の対物レンズを取り外し、位相板付きの対物レンズに置き換えます。 接眼レンズを位相差顕微鏡用の集束接眼レンズに交換します。 特別な緑色のフィルター (必要でない場合もあります) が光源の光の入口に配置されます。
2) 光の調整と焦点: 視野内に白丸と黒丸がはっきりと見えるまで、焦点接眼レンズと厚さ調整ネジを調整します。 黒丸は固定されており、白丸は集光装置のネジを調整することで移動でき、黒丸と白丸が完全に一致します。 焦点合わせ接眼レンズを取り外し、顕微鏡の元の接眼レンズに交換して確認します。
位相差顕微鏡使用時の問題点の解析
1. 試料厚さの影響 位相差観察を行う場合、試料厚さは5μm以下である必要があります。 厚いサンプルを使用すると、サンプルの上層は非常に透明になりますが、深い層はぼやけて位相シフト干渉を引き起こします。 そして光の散乱。
2. カバーガラスとスライドガラスの影響 試料をカバーガラスで覆うと、環状絞りの明るいリングと位相板の暗いリングが重なりにくくなります。 位相差観察では、スライドガラスやカバーガラスのガラス品質も高く求められます。 傷や厚みムラ、凹凸があると、ブライトリング歪みや位相干渉が発生します。 また、スライドが厚すぎたり薄すぎたりすると、環状絞りのブライトリングが大きくなったり小さくなったりします。
3. ハローとフェード効果 位相差顕微鏡の結像プロセスにおいて、位相遅延により特定の構造が暗くなる場合、それは光の損失ではなく、像面上での光の再分布の結果です。 そのため、暗い領域で明らかに失われた光は、暗いオブジェクトの周囲に明るいハローとして表示されます。 これは、微細構造の観察を妨げる位相差顕微鏡の欠点であり、環状絞りが非常に狭い場合、ハロー現象はより深刻になります。 位相コントラスト顕微鏡におけるもう 1 つの現象はシェーディング効果です。これは、位相コントラストで観察した場合に、同じ位相遅延を持つ広い領域のエッジでコントラストが失われることを指します。
4. 位相反転 n'n のとき、画像の明暗のコントラストが正反対になることを位相反転といいます。 位相差δ=0では認識できなくなり、δが大きくなるにつれてコントラストが大きくなり、δが一定値まで増加し続けると位相反転が現れます。 90 パーセントの高吸光度値 (高コントラスト) 対物レンズを使用する場合、この変換値は約 0.55 λ であり、70 パーセントの標準吸光度値の対物レンズを使用する場合、それは約 0.33 λ です。 。 より小さな光路差を解決するには、より高い吸光度値を持つ対物レンズを使用する必要があります。
