光学顕微鏡検査にはどのようなサンプル仕様が必要ですか?
光学顕微鏡のサンプル準備プロセスでは、サンプルのスライス厚さは 2-25 μm から 100 μm の間です。 電子顕微鏡のスライス厚は 50-100nm 以内です (サンプル厚さが 1um に達する可能性がある高電圧電子顕微鏡を除く) ため、使用されるスライス方法はすべて同じではありません。
担体に関しては、光学顕微鏡部の担体はスライドガラスであり、電子顕微鏡部の担体はグリッドである。
固定に関しては、光学顕微鏡のスライスは複合固定剤で固定されますが、電子顕微鏡のスライスは単一の固定剤で繰り返し固定されます。
染色に関しては、光学サンプルの染色は比較的簡単です。 観察サンプルや光学顕微鏡の種類に応じて、通常はいくつかの固定染色剤で染色するだけで十分です。 電子顕微鏡サンプルを再染色するには、ネガティブ染色、銀染色など、多くの複雑な方法があります。
包埋に関しては、光学顕微鏡切片の包埋剤としてパラフィン、コロジオン、ゼラチンなどが使用されています。 電子顕微鏡断面の包埋剤としては、エポキシ樹脂、ポリスチレン樹脂、イソブチレン樹脂、水溶性樹脂などが使用されています。
顕微鏡の視野を均一かつ完全に照明できるようにするには、顕微鏡を最初に設置してデバッグするときに照明光学系を調整する必要があります。 これは顕微鏡を正しく使用し、正確で信頼性の高い結果を得るための重要な手段であり、最も基本的な方法です。 要件。 また、照明光路系の調整を正しくマスターすることは、顕微鏡の使用中に光源バルブを交換した後に必要な作業であり、日常的に顕微鏡の性能を時々確認するためにも必要な手段です。使用。 顕微鏡照明光路系の調整は主に以下の 4 項目で構成されます。 1. 顕微鏡外部の光源ランプ室の事前調整 ① まずランプ室のシェルを開け、スプリングクリップを押してハロゲンバルブをランプ室の中に入れます。電球に指紋やその他の汚れが付くと、電球の寿命に影響を及ぼします。 ②ランプハウスをテーブルの上に置き、電源を入れた後、専用ドライバーを使用してランプのフォーカスノブ穴（「←→」マーク）を調整し、フィラメントが壁に投影されるようにします1-2 m 離れると、フィラメントのイメージが調整されます。 次に、ランプの高さを調整し、フィラメントの位置が適切になるようにネジ穴 (「──」のマーク) を調整します。 ランプの左右の位置を調整してネジ穴（「──」の部分）を調整し、フィラメントの左右の位置が適切になるようにします。
2. 顕微鏡における光源発光体（フィラメント）の位置の確認と修正の目的は、光源の像端が対物レンズの視野内に直角に収まるように調整し、視野が確保されるようにすることです。顕微鏡は、光源の観点から完全かつ均一に照明されます。 Kuhler 照明システムを調整するための前提条件である照明。 必要な基本ツール: センタリング望遠鏡は、顕微鏡の購入時に装備されています。 ① ランプハウスの曇りガラススリーブのプラグを抜き、ランプハウスを顕微鏡に戻します。 ② 10 倍の対物レンズを選択し、光源プログラムをオンにしてサンプルを見つけて明確に焦点を合わせます。次に 40 倍の対物レンズを使用してサンプルを明確に焦点に合わせます (40 倍の対物レンズでフィラメントの全体像を見ることができます) ); ③ コンデンサーの開口絞りと視野絞りを最大限に開きます。 ④ 接眼レンズの片方を外し、センタリング望遠鏡に交換し、白い部分を掴み、もう一方の手で黒い接眼レンズを伸ばすと、視野内にフィラメントの像が見えます。 ⑤ フィラメントの位置が適切でない場合は、「──」穴を調整して水平方向のフィラメントイメージを調整し、「──」穴を調整して垂直方向のフィラメントイメージを調整してフィラメントイメージを調整します。対物レンズの開口部をちょうど満たす光の円形の像。 ⑥ 調整後、すりガラススリーブを元の位置に挿入し、センタリング望遠鏡のプラグを抜き、接眼レンズを交換して次の調整を行ってください。 上述した顕微鏡外での照明光源灯室の調整と顕微鏡内での光源発光体の位置の確認は、顕微鏡の初回設置時やデバッグ時、バルブ交換時に行えばよい。 、顕微鏡を使用するときに顕微鏡をランダムに調整することはできません。 混乱した場合は、上記の手順に従って元の状態に戻すことができます。
3. ケーラー照明系の正しい調整 顕微鏡の正しい調整の主な作業の 1 つは照明光路系の調整であり、鍵となるのはケーラー照明系の調整です。 顕微鏡を使用するすべての人、特に顕微鏡写真を撮影する人は、顕微鏡の機能を最大限に発揮して写真を撮影するために、クーラー照明システムの原理とその調整手順をある程度理解し、習熟する必要があります。 出来上がった写真はより一貫性があり、効果的に完璧なものになります。 ケーラー照明システムの原理は簡単です。光源上の任意の点から発せられた光は顕微鏡の視野を照明することができ、光源上の各点から発せられた光は収集され、視野内に配置されます。顕微鏡の視野の非常に完全で均一な照明が達成されます。 クーラー照明システムを調整する目的は、観察される視野に対して均一かつ十分な照明を得ることであり、撮影中にフィルムが曇るのを避けるために、迷光が結像システムに影響を与えたり干渉したりするのを防ぐことです。 高調整ケーラー照明システムに必要なコンポーネント: 視野絞り、軸上で調整可能なコンデンサー レンズ システム。 ① 対物レンズは 10 倍、接眼レンズは 10 倍を選択します。 ② コンデンサーの前玉を光路に入れ、開口絞りを大きすぎず、小さすぎず適度な位置に調整し、コンデンサーを高さまで上げます。コンデンサーターンテーブルを明視野「J」位置に調整します。 ③ 視野絞りを最小（0.1）に調整します。
④ 密封された生体サンプルをステージ上に置き、光源をオンにし、焦点をはっきりと合わせます
⑤ 視野内に部分的に照らされた領域または明るいスポットがあり、これは視野絞りのぼやけた画像であり、サンプルの詳細がはっきりと見えることがあります。 外側では視野が暗くなり、必ずしもサンプルの詳細がはっきりと見えるとは限りません
⑥コンデンサーを下方向に少し調整すると、視野内の輝点が徐々に縮小し、徐々に鮮明な多角形の像になります。これが視野絞りの鮮明な像です。
⑦一般にポリゴン像は視野の中心にないため、視野絞りのポリゴン像を中心位置に合わせるためにコンデンサーのセンタリングネジを調整する必要があります。
⑧視野絞りを徐々に開いてポリゴン画像を視野の内接多角形にし、さらにアライメント状態を確認します。 位置合わせが理想的でない場合は、位置合わせネジの微調整を続けます。
⑨視野の絞りを少し開いて、多角形の像が視野の端にちょうど消えるようにします。 ここまででケーラー照明系の調整は完了です。 ケーラー照明システムを調整すると、視野全体が均一に照明され、撮影された顕微鏡写真は通常のコントラストで明るく鮮明になります。
