レーザー走査型多光子顕微鏡の進歩によるメリット
レーザー走査型多光子顕微鏡は光学顕微鏡を大幅に改良したもので、主に生細胞、固定細胞、組織の深部構造を観察し、試料の 3 次元固体構造を構築するために使用できる鮮明で鮮明な多層 Z- 面構造、つまり光学スライスを取得できる機能に現れています。-共焦点顕微鏡では、レーザー光源を使用します。レーザー光源は、対物レンズの焦点面全体を満たすように拡大され、その後、対物レンズのレンズ系を通じて標本の焦点面上の非常に小さな点に収束します。対物レンズの開口数によると、最も明るい照明点の直径は約0.25-0.8μm、深さは約0.5-1.5μmです。共焦点のサイズは、顕微鏡の設計、レーザー波長、対物レンズの特性、走査ユニットの状態設定、および試料の特性によって決まります。顕微鏡の照明範囲と被写界深度は広いのに対し、共焦点顕微鏡の照明は焦点面上の安全な焦点に焦点を合わせます。共焦点顕微鏡の最も基本的な利点は、厚さが約 0.5 ～ 1.5 μ m の厚い蛍光標本 (最大 50 μ m 以上) に対して微細な光学的切片を作成できることです。一連の光学スライス画像は、顕微鏡の Z- 軸ステッピング モーターを使用して標本を上下に移動させることによって取得できます。画像情報の収集は安全な平面内で制御され、標本上の他の場所から発せられる信号によって干渉されることはありません。バックグラウンド蛍光の影響を除去し、信号対雑音比を高めた後、共焦点画像のコントラストと解像度は、従来のフィールド照明蛍光画像と比較して大幅に向上しました。多くの標本では、複雑な構造コンポーネントが絡み合って複雑なシステムを形成していますが、十分な光学切片を収集できれば、ソフトウェアを使用してそれらを 3 次元で再構成できます。この実験方法は、細胞または組織間の複雑な構造的および機能的関係を解明するために生物学研究で広く使用されています。
