透過型蛍光顕微鏡と反射型蛍光顕微鏡の違いとメリット・デメリット
1. 透過型蛍光顕微鏡：励起光源をコンデンサーを介して試料材料に透過させ、蛍光を励起します。一般的に使用される暗視野集光器または通常の集光器を使用して反射板を調整し、励起光と側方光を試料に変換することができます。比較的昔ながらの蛍光顕微鏡です。低倍率で蛍光が強いのが長所ですが、倍率が上がると蛍光が弱くなるのが短所です。したがって、より大きな試料材料の観察に適しています。
2. 落射蛍光顕微鏡：現代に開発された新しいタイプの蛍光顕微鏡です。これまでと異なり、励起光は対物レンズから標本の表面に落ちます。照明コンデンサーと蛍光を収集するための対物レンズは同じ対物レンズを使用します。デュアルカラービームセパレーターを光路に追加する必要があり、光ウランと45度の角度を形成します。励起光は対物レンズに反射されて試料上に集まります。試料から発生した蛍光と、対物レンズやカバーガラスの表面で反射した励起光は同時に対物レンズに入射し、二色光分離器に戻り、励起光と蛍光を分離します。その後、残留励起光はブロッキングフィルターによって吸収されます。励起フィルター、二色ビーム分離器、および遮断フィルターのさまざまな組み合わせを使用すると、さまざまな蛍光反応生成物のニーズを満たすことができます。この蛍光顕微鏡の利点は、均一な視野照明、鮮明な画像化、および高倍率でのより強い蛍光です。
透過型蛍光顕微鏡の長所と短所
光源：高圧水銀ランプまたはハロゲンランプ。
スポットライトミラー: 暗視野スポットライトを使用して励起と蛍光を分離します。
対物レンズ: あらゆる種類の対物レンズを使用できます。
試料: 薄い試料は透過観察に適しています。
メリット： ①暗視野コンデンサーを使用しているため、対物レンズに励起光が入らないため、暗い背景を作りやすく、コントラストが良く、どのような対物レンズでも観察可能です。 ② 低倍率対物レンズを使用した場合、反射型蛍光顕微鏡よりも明るくなります。
欠点：スポットライトの中心と高さを正しく調整しないと、明るい蛍光画像が得られません。暗視野スポットライトの焦点距離の制限により、厚いスライドガラスは使用できません。視野の照明領域が大きすぎないように注意してください。大きすぎると、蛍光標本の蛍光色が退色する可能性があります。厚い標本や不透明な標本は適していません。
反射蛍光顕微鏡の長所と短所
光源：高圧水銀ランプまたはハロゲンランプ。
集束レンズ：対物レンズが集束レンズの役割を果たすため、集束レンズは必要ありません。
対物レンズ: 使用する対物レンズは、開口数に制限がなく、紫外光を十分に透過でき、それ自体が蛍光を発しないものでなければなりません。
試料：厚い試料も不透明な試料も観察可能。
メリット： ① 対物レンズがスポットライトを兼ねるため、調整の手間がかかりません。 ② コーラー照明法を採用することで、絞りや視野絞りの効果を利用できる 対物レンズの開口数に制限がなく、高倍率でも高解像度の画像が得られる 厚い標本や不透明な標本も観察可能他の観察方法も反射蛍光と組み合わせることができ、特に位相差法や透過微分干渉法を組み合わせることで、不要な蛍光の退色現象を回避できます。
欠点: 地上倍率対物レンズを使用する場合、画像は比較的暗いため、高開口数の対物レンズを使用する必要があります。フィルター システムは、励起発光と蛍光を効果的に分離する必要があります。
