直接微生物学的顕微鏡計数法の実験手順
1. 希釈
サッカロミセス・セレビシエ懸濁液は適切に希釈する必要がありますが、菌液が濃くない場合は希釈できません。
2. 計数室の鏡検査
サンプルを追加する前に、まず計数プレートの計数室を検査する必要があります。汚れがある場合は、計数する前に清掃する必要があります。
3. サンプルの追加
清潔で乾燥したヘマトクリットプレートをカバーガラスで覆い、無菌の細口ビュレットで希釈したビール酵母液をカバーガラスの端から滴下します（滴下しすぎないようにします）。これにより、毛細管現象によって細菌液が隙間に沿って計数室に浸透し、計数室全体が細菌液で満たされます。気泡がないように注意してください。
4. 顕微鏡によるカウント
5分間休ませた後、血液計数プレートを顕微鏡キャリアステージに置き、まず低倍率で計数チャンバーの位置を見つけ、次に高倍率に変更して計数します。計数前に細菌液が濃すぎるか薄すぎることが判明した場合は、計数前に希釈度を再調整する必要があります。通常、サンプル希釈には、各小細胞に約 5-10 個の微生物が必要です。各計数チャンバーについて、5つの中央コンパートメント（中央コンパートメントの4つの角と中央を選択できます）の微生物がカウントされます。グリッド線上にある細菌は、通常、上部と右側の線でのみカウントされます。酵母の出芽の場合、出芽体が親細胞の半分のサイズであれば、2つの微生物がカウントされます。2つの計数チャンバーからサンプルをカウントして値をカウントし、サンプルの細菌含有量を計算します。
5. ヘマトクリットプレートの洗浄
使用後は、水ケージ内の血球計数プレートを水柱ですすぎ、硬いものを使用して洗浄したり、ブラシで磨いたり、洗って乾かしたり、ヘアドライヤーで乾かしたりしないでください。プレートを顕微鏡で検査し、各小区画に残留微生物やその他の沈殿物があるかどうかを観察します。きれいでない場合は、きれいになるまで洗浄を繰り返す必要があります。
