蛍光顕微鏡標本の準備要件

Apr 28, 2024

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蛍光顕微鏡標本の準備要件

 

(i) スライド
スライドの厚さは 0.8 ~ 1.2 mm にする必要があります。厚すぎると、一方では光吸収が多くなり、他方では標本に集められた光の励起ができなくなります。スライドは滑らかで、厚さが均一で、明らかな自己蛍光がないものでなければなりません。石英ガラスのスライドを使用する必要がある場合もあります。


(ii) カバーガラス
カバーガラスの厚さは約 0.17mm で滑らかです。励起光を強化するために、カバーガラスを干渉させることもできます。これは、カバーガラスの表面に異なる波長の光の層を何層もメッキした特殊な表面処理で、カバーガラスの干渉物質 (フッ化マグネシウムなど) に異なる役割を果たします。これにより、滑らかな表面を通して蛍光を発し、励起光を反射し、励起光の反射によって標本を励起することができます。


(C)標本
組織切片やその他の標本は厚すぎてはなりません。厚すぎると、励起光が標本の下部でほとんど消費され、対物レンズで直接観察する標本の上部の励起が不十分になります。さらに、細胞が重なったり、不純物が隠れたりして、判定に影響します。


(D)シーリング剤
シーリング剤として一般的に使用されるグリセリンは、自己蛍光がなく、無色透明で、蛍光の明るさが pH 8.5 ~ 9.5 のときに明るくなり、すぐに消えにくいものでなければなりません。そのため、シーリング剤として一般的に使用されるグリセリンと 0.5 mol / l pH9. 0 ~ 9.5 の炭酸緩衝液の等量の混合物です。


(E)ミラーオイル
一般的な暗視野蛍光顕微鏡やオイルミラー標本の観察では、ミラーオイルを使用する必要があります。*専用の非蛍光ミラーオイルをうまく使用し、上記のグリセロールの代わりに使用することもできます。流動パラフィンも使用できますが、屈折率が低く、画質に若干の影響があります。

 

5 Digital Soldering microscope

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