微生物量の測定 - 顕微鏡直接計数法！
細菌集団の増殖は、細胞数の増加または細胞物質の増加によって特徴付けられます。細胞数を測定するには、直接顕微鏡計数、プレート計数、分光光度計によるターボメトリー、最確数 MPN、膜濾過など、いくつかの方法があります。細胞物質を測定する方法には、細胞の乾燥重量の測定、窒素、RNA、DNAなどの細胞の特定の成分の含有量の測定、および代謝産物の測定が含まれます。要約すると、微生物の増殖を測定する方法は数多くあり、それぞれに長所と短所があり、作業における特定の要件に基づいて選択する必要があります。この実験では主に、生産や科学研究の作業で一般的に使用される顕微鏡直接計数方法を紹介します。
目的要件
1. 血球計数盤を使用した計数原理を明らかにする。
2. 微生物計数のための血球計数ボードの使用方法をマスターします。
2、基本原則
顕微鏡直接計数法は、サンプルの少量の懸濁液を、特定の面積と体積の特別なスライドガラス上に置き、顕微鏡下でサンプルの懸濁液を直接計数する、シンプル、高速、直感的な方法です (バクテリアカウンターとも呼ばれます)。現在、国内外で一般的に使用されている細菌計数装置には、血球計数プレート、ペテロフ・ハウザー細菌計数装置、およびホークスリー細菌計数装置があり、これらはすべて酵母、細菌、真菌胞子などの懸濁液の計数に使用できます。同じ基本原理で。後者の 2 種類のバクテリアカウンターは、カバーガラスで覆われた後の総体積が {{0}}.02mm3 であり、カバーガラスとキャリアスライド間の距離はわずか 0.02mm です。したがって、油浸対物レンズを使用して、細菌などの小さな細胞を観察および計数することができます。これらの細菌計数器を用いるほかに、一般に牛乳の細菌検査に用いられる、塗抹標本面積と野面積の比率を顕微鏡で直接観察して推定する方法もあります。顕微鏡を使用して直接計数する利点は、直感的で、高速で、操作が簡単であることです。ただし、この方法の欠点は、測定結果が通常、死んだ細胞と生きた細胞の合計になることです。現時点では、生細胞染色チャンバー培養（短時間）を組み合わせたり、細胞分裂阻害剤を添加して生細胞のみを計数するという目標を達成するなど、この欠点を克服できる方法がいくつかあります。
顕微鏡下で直接計数する例として、血球計数ボードを使用します。他の 2 つのバクテリアカウンターの使用方法は、各メーカーのマニュアルに記載されています。血球計数プレートを使用した顕微鏡下での直接計数は、微生物の計数に一般的に使用される方法です。計数盤は特別に作られたスライドガラスで、その上に 3 つのプラットフォームを形成する 4 つの溝があります。中央の広いプラットフォームは短い水平溝によって 2 つの半分に分割されており、プラットフォームの両側には格子があります。各グリッドは 9 つの大きなグリッドに分割されており、中央の大きなグリッドが計数室です。血球計数プレートの構造を図1に示します{{0}}。計数室のスケールには、一般的に 2 つの仕様があります。 1 つは、大きな正方形が 25 個の中央の正方形に分割され、各正方形がさらに 16 個の小さな正方形に分割されることです (図 15-2)。もう一つの方法は、大きな正方形を 16 個の中正方形に分割し、各正方形をさらに 25 個の小さな正方形に分割することです。ただし、カウンティング ボードのサイズに関係なく、各大きな正方形には 4 つの小さな正方形があります00。正方形の一辺の長さを 1mm とすると、大きな正方形の面積は 1mm2 となります。カバーガラスで覆った後のカバーガラスとスライドの間の高さは0.1mmなので、計数室の容積は0.1mm3（1000分の1ミリリットル）となります。図 15-1 血球計数ボードの構造 (I) 図 15-2 血球計数ボードの構造 (II) A 正面図。 B. 垂直断面図。拡大されたグリッドの中央には計数室として大きな正方形があります。 1. 血球計数ボード。 2. カバーガラス。計数室で計数する場合、通常、総細菌数は 5 つの正方形で計算され、各正方形の平均値が取得され、25 または 16 を掛けて大きな正方形の総細菌数が得られ、これが次の数値に変換されます。 1mlの細菌溶液中の総細菌数。 5つの正方格子内の総細菌数をA、菌液の希釈倍率をBとすると、正方格子内に計数板が25枚ある場合、菌液1mL中の総細菌数はA/5×25×104となります。 × B=50000A · B 同様に、正方形のグリッドに 16 枚の計数プレートがある場合、1 mL の細菌溶液中の総細菌数は A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
