オイルレンズの倍率が通常の対物レンズより大きいのはなぜですか?
微生物実験で染色前に細菌を固定する必要がある理由:
1: 細胞を殺し、染料で染まりやすい。
２：細菌をスライドガラスに付着させ、水に洗い流されにくい。
固定するときはゆっくりと乾燥させてください。 どうしても早く乾燥させたい場合は、アルコールランプの炎の上で数回遠ざけて乾燥させてください。 ガラスのスライドを熱くしないでください。熱くしないと、バクテリアの生命体が死滅する可能性があります。
グラム染色と細菌の顕微鏡観察
1. 実験原理
グラム染色の原理: 細菌は、細胞壁の組成と構造により、グラム染色に対する反応が異なります。 グラム陽性菌の細胞壁は、主にペプチドグリカンによって形成されたネットワークの結び目です。 エタノールで処理すると、脱水により網目構造の細孔径が小さくなり、透過性が低下するため、クリスタルバイオレット－ヨウ素の複合体物質が溶出・細胞内に滞留しにくくなり、青色－一次染色剤の紫色は、脱色および対比染色後も保持されます。 グラム陰性菌の細胞壁はペプチドグリカン層が薄く、脂質含量が高いため、脱色処理を行うとエタノール（またはアセトン）により脂質が溶解し、細胞壁の透過性が高まるため、クリスタルバイオレットとヨウ素の複合体が溶出しやすく、対比染色で対比染色すると細胞が対比染色の赤色に染まります。 顕微鏡の結像原理：現代の通常の光学顕微鏡は、接眼レンズと対物レンズの2つのレンズ系を使用して像を拡大するため、複合顕微鏡と呼ばれることがよくあります。 顕微鏡の光学系では対物レンズの性能が最も重要であり、微生物の研究では倍率が最も大きいオイルレンズが最も重要です。 スライドガラスとレンズの間にイマージョンオイルを添加する主な目的は、照明の明るさを高め、顕微鏡の解像度を高めることです。 光の伝達媒体として空気の代わりに油を使用することで、光の屈折や全反射を軽減し、観察像をより鮮明にします。
2. 実験装置
1. コロニー:
大腸菌24時間栄養寒天斜面培養、
黄色ブドウ球菌は約 24 時間の栄養寒天斜面培養、枯草菌は約 24 時間の栄養寒天斜面培養。
2. 溶液または試薬:
蒸留水、ヨウ素溶液、クリスタルバイオレット染色液、95パーセントアルコール、サフラニン染色液、シダーオイル。 3. 楽器:
顕微鏡、スライドガラス、接種ループ、アルコールランプ、ピンセット、レンズティッシュ。
3. 実験手順
a:
1.スミア
スライドを取り出し、スライドに点火し、スライド上のアルコールを焼き尽くして滅菌し、中央に蒸留水を少量滴下し、接種ループを使用してテストの傾斜媒体上の少量の細菌を静かに採取します。試験管の全プロセス中、試験管の口はアルコールランプの上にあり、培地の汚染を防ぐために速度が速い必要があります。 次に、円を描くようにスライドガラス上に小さな水滴を塗り、水滴が曇ったところで止め、乾燥して固定されるのを待ちます。
2.一次染色
クリスタルバイオレット（細菌の膜を覆うだけが適切です）をコロニーに滴下し、1-2分間染色し、染色溶液を捨て、溶出液が無色になるまでスライドの上から細水ですすぎます。そして染色液をスライド上に置きます。 スライスについた水分を振り落とします。
3.媒染剤
ヨウ素水を滴下して残留水を洗い流し、蓋をして約1分間放置し、水で洗浄します。
4.脱色
スライドガラス上の水を振り落とし、スライドガラスを傾け、流出するアルコールが青く見えなくなるまで、白い背景の下に95パーセントのアルコールを加えて脱色し、すぐに水でアルコールを洗い流し、スライドガラスを置きます。スライスの水を切ります。
5.対比染色
サフラニン溶液で約 1-2 分間対比染色し、水で洗浄し、吸収紙で吸い取り乾燥させます
6. 顕微鏡検査:
低倍率レンズの下で観察したい細菌のコロニーを探します（スライドを動かし続け、赤い影を感じたらすぐに止め、倍率を調整し、コロニーでない場合は探し続けます）、鏡筒を上げ、そしてオイルミラーに切り替えます。 試料部分に杉油を一滴たらし、油レンズが油に浸かり試料に触れる程度まで粗調整器で鏡筒を慎重に下げます。 コンデンサーを最高位置まで上げ、絞りを全開にし、粗調整器を使用して物体の像が視野に現れるまで鏡筒をゆっくりと上げ、微調整器を使用して鮮明に焦点を合わせます。
