レーザー走査型多光子顕微鏡の改良によるメリット
レーザー走査型多光子顕微鏡は、光学顕微鏡における大きな進歩です。これらは主に、生細胞、固定細胞および組織の深部構造を観察し、試料の三次元固体構造を再構成するために使用できる鮮明で鮮明な多層 Z 面構造、つまり光学切片を取得することができます。
共焦点顕微鏡はレーザー光源を使用します。拡大されたレーザービームは対物レンズの後焦点面全体を満たし、その後対物レンズシステムを通過して試料の焦点面上の非常に小さなスポットに収束します。対物レンズの開口数に応じて、照射スポットの直径は約 0.25 ～ 0.8 μm、深さは約 0.5 ～ 1.5 μm になります。共焦点スポットのサイズは、顕微鏡の設計、レーザー波長、対物レンズの特性、走査ユニットのパラメーター設定、および試料の特性によって決まります。
広視野顕微鏡は広い照明領域と深い照明深度を特徴としますが、共焦点顕微鏡の照明は焦点面上の小さな焦点に集中します。共焦点顕微鏡の基本的な利点は、切片の厚さが 0.5 ～ 1.5 μm の範囲で、厚い蛍光標本 (最大 50 μm 以上) に対して微細な光学的切片を作成できることです。顕微鏡のZ軸ステッピングモーターを介して試料を垂直に移動させることで、一連の光学断面画像を取得できます。画像取得は選択した平面に限定され、試料の他の領域から発せられる信号によって妨げられることはありません。バックグラウンド蛍光を除去し、信号対雑音比を改善した後、共焦点画像は、従来の広視野蛍光画像と比較して、著しく高いコントラストと解像度を示します。
多くの標本では、多数の複雑な構造コンポーネントが絡み合って複雑なシステムを形成しています。十分な光学断面画像が取得されたら、ソフトウェアを使用して 3 次元再構成を実行できます。この実験方法は、細胞または組織間の複雑な構造的および機能的関係を解明するために生物学研究に広く適用されています。
