蛍光顕微鏡と通常の光学顕微鏡の違い

蛍光顕微鏡と通常の光学顕微鏡の違い

蛍光顕微鏡は従来の光学顕微鏡とは異なります。通常の光源からの光で標本を観察するのではなく、特定の波長の光（通常は紫外光または青紫光）を使用して、顕微鏡スライド上の標本内の蛍光物質を励起し、蛍光を発光させます。したがって、蛍光顕微鏡の光源は標本を直接照明しません。それは、標本内の内因性蛍光物質を励起するエネルギー源として機能します。私たちが標本を見ることができるのは、光源そのものからの照明によってではなく、標本の内部にある蛍光物質が励起光のエネルギーを吸収して蛍光を発するためです。

したがって、蛍光顕微鏡の最大の特徴は、光源から特定の波長帯域の励起光を供給し、検査標本中の蛍光物質が十分な強度の蛍光を発することができることです。一方、蛍光顕微鏡には対応するフィルターシステムが装備されている必要があります。蛍光組織化学には不可欠な機器です。蛍光顕微鏡は主に、超高圧光源、フィルター系（励起フィルターやバリアフィルターを含む）、光学系、撮影系で構成されています。特定の波長の光を使用して蛍光物質を励起することで機能します。

① 蛍光励起方法 励起光の波長範囲により、UV励起法（紫外照明法）とBV励起法（青紫色照明法）の2種類があり、UV励起法は400nmより短い紫外光を励起に用います。目に見えない蛍光を発生させるため、観察される蛍光は標本自体からのものです。この方法では、特定の蛍光と背景の自己蛍光を簡単に区別できます。

② BV 励起法 BV 励起法では、404 nm と 434 nm を中心とした紫から青色の励起光を使用します。標本への照射には青色光が使用されるため、この方法の励起フィルター システムは青色光を完全に遮断し、必要な緑色と黄色の光のみを通過させる必要があります。蛍光抗体染色の場合、励起光の最大吸収波長は蛍光色素の最大発光波長に近いです。このため、BV励起用のフィルタセットにはカットオフバリアフィルタを使用する必要があります。この方法では励起に青色光を使用するため、蛍光の集光効率が比較的高く、より明るい画像が得られます。欠点は、500 nm を超える蛍光が検出できず、500 nm を超えると黄緑色の画像しか見られないことです。蛍光抗体染色では、特異性の判断は色情報に大きく依存するため、微妙な特異性を議論する際には、BV 励起法の欠点が大きな制限となる可能性があります。