蛍光顕微鏡関連の知識
共焦点蛍光顕微鏡の基本原理: 点光源を使用して標本を照射し、明確に定義された小さな光スポットが焦点面に形成されます。 スプリッターで構成されています。 ビームスプリッターは蛍光を検出器に直接送ります。 光源と検出器の前にはピンホールがあり、それぞれ照明ピンホールと検出ピンホールと呼ばれます。 2 つの幾何学的サイズは同じで、約 100-200nm です。 焦点面上の光スポットに関して、この 2 つは共役です。つまり、光スポットは一連のレンズを通過し、最終的に照明ピンホールと検出ピンホールに同時に焦点を合わせることができます。 このようにして、焦点面からの光は検出穴の範囲内に収束することができますが、焦点面の上または下からの散乱光は検出穴の外側でブロックされ、画像化できません。 レーザーはサンプルを点ごとにスキャンし、ピンホールを検出した後の光電子増倍管も、対応する光の点ごとの共焦点画像を取得します。これはデジタル信号に変換されてコンピューターに送信され、最終的に鮮明な画像に集約されます。画面上の焦点面全体の共焦点画像。
各焦点面の画像は実際には試料の光学断面であり、この光学断面は常に一定の厚さを持ち、光学薄片とも呼ばれます。 焦点での光強度は非焦点での光強度よりもはるかに大きく、非焦点面の光はピンホールによってフィルタリングされるため、共焦点システムの被写界深度はほぼゼロであり、Z 方向に沿って走査します。 -軸は光トモグラフィーを実現し、サンプルの集光スポットで二次元の光学断面を観察します。 XY面（焦点面）走査とZ軸（光軸）走査を組み合わせることで、連続した層の2次元画像を蓄積して試料の3次元画像を取得し、専用のコンピュータソフトウェアで処理することができます。
すなわち、検出ピンホールと光源ピンホールは常に同じ点に焦点を結ぶため、焦点面の外側で励起された蛍光は検出ピンホールに入射することができない。
レーザー共焦点の動作原理を簡単に表現すると、レーザー光を光源として使用するということになります。 従来の蛍光顕微鏡イメージングをベースに、レーザー走査装置と共役集束装置を追加し、コンピュータ制御によるデジタル画像の取得と処理を行うシステムです。
