蛍光顕微鏡の使用方法と注意事項
使用方法:
(1)材料シートをキャリアステージに載せる。
(2)蛍光顕微鏡の電圧レギュレータをオンにします。次に、スタートグループを押してUVランプを点灯します。UVランプは15分間オフにしないでください。また、オフにした後3分間は再起動しないでください。
(3)励起フィルターをvに、二色性フィルムをvに回し、495nmまたは475nmの遮断フィルターを選択します。
(4)uvFL40、uvFL100蛍光受光対物レンズ顕微鏡を選択します。
(5)スライドに非蛍光オイルを塗布し、まず40倍、次に100倍に焦点を合わせた顕微鏡で観察します。蛍光を発します。
(7)蛍光物質は紫外線照射により蛍光の増殖とともに時間の経過とともに徐々に弱まるため、顕微鏡検査では視野を頻繁に変える必要がある。
(8)UVFL10またはUVFL20低倍率顕微鏡材料(非蛍光オイルを添加しない低倍率)も使用可能。
蛍光画像記録方法:
蛍光顕微鏡で観察される蛍光画像は、1つは形態特性、もう1つは蛍光の色と明るさであり、結果を判断する際には、この2つを組み合わせて総合的な判断を行う必要があります。結果は主観的な指標、つまり作業者の目視による観察によって記録されます。一般的な定性的な観察としては、基本的に信頼できます。科学技術の発展に伴い、程度の差はありますが、細胞分光光度計、画像分析装置などの機器を使用して、客観的な指標を使用して判断結果を記録しています。ただし、これらの機器で記録した結果も主観的な判断と組み合わせる必要があります。
蛍光顕微鏡の撮影技術は、蛍光が褪色しやすく弱くなりやすいため、撮影結果を即座に記録するために蛍光画像の記録に非常に重要です。方法は、通常の顕微鏡撮影と基本的に同じです。ASA200以上または24以上の高感度写真フィルムを使用するだけです。紫外線は蛍光バースト効果に影響を与えるため、FITCマーカーなど、紫外線照射30秒で蛍光輝度が50%低下します。そのため、露光速度が遅すぎて蛍光画像をキャプチャできません。一般的な研究用蛍光顕微鏡には、半自動または全自動の顕微鏡写真システムデバイスがあります。
予防:
(1)蛍光顕微鏡の工場マニュアルの要求に厳密に従って操作し、手順を恣意的に変更しないでください。
(2)検査は暗室で行います。暗室に入ったら電源を入れ、超高圧水銀ランプを5-15分間点灯し、光源が強い光を発して安定し、目が完全に暗室に慣れるまで待ってから標本の観察を開始します。
(3)紫外線による目の損傷を防ぐため、光源を調整する際には保護メガネを着用してください。
(4)毎回の検査時間は1~2時間が適切で、90分を超えると超高圧水銀ランプの光度が徐々に低下し、蛍光が弱まります。試料に紫外線を3~5分間照射すると、蛍光も著しく弱まります。したがって、*は2~3時間を超えてはいけません。
(5)蛍光顕微鏡の光源の寿命は限られているため、時間を節約し、光源を保護するために、標本を集中的に検査する必要があります。高温の場合は、冷却ファンを追加し、新しい電球は使用開始から時間を記録する必要があります。ランプが消えて再び使用する場合は、点灯する前に電球を十分に冷却する必要があります。光源を数回避ける必要があります。
(6)染色後は、蛍光が徐々に弱まるため、直ちに標本を観察してください。標本をポリエチレン製のビニール袋に入れて4度で保存すると、蛍光が弱まる時間を遅らせ、密封剤の蒸発を防ぐことができます。
(7)蛍光輝度の判定基準:一般的に4段階に分けられ、すなわち、「1」は蛍光がないか、または弱い蛍光が見える。「+」ははっきりとした蛍光のみが見える。「+ +」は明るい蛍光が見える。






