多光子レーザー走査型顕微鏡の概要: 利点と欠点
1. 赤色光または赤外光で励起されると、光の散乱が小さく、小さな粒子の散乱は波長の 4 乗に反比例します。
2. ピンホールを必要とせずに、イメージング断面からのより多くの散乱光子を収集できます。
3. ピンホールは焦点のぼけた領域または焦点領域から放出される散乱光子を区別できず、深部イメージングでは多光子の方が信号対雑音比が優れています。
4. 単一光子励起に使用される紫外光または可視光は、ビームが焦点面に到達する前にサンプルによって容易に吸収および減衰されるため、深層の励起が困難になります。
5. 生物顕微鏡観察においては、生物そのものの活性状態を損なわず、水、イオン濃度、酸素、栄養素の循環を維持することが第一に考慮されます。光観察の分野では、熱エネルギーと光子エネルギーの両方が、細胞に損傷を与えない照射量と光エネルギーの範囲内に収まらなければなりません。
6. 多光子顕微鏡には多くの利点があります。三次元分解能、深さ侵入、散乱効率、背景光、信号対雑音比、制御などの点で、これまでのレーザー顕微鏡にはない、あるいは超えられない特性があります。
多光子レーザー走査型顕微鏡の欠点:
1. 蛍光イメージング専用。
2. サンプルに励起光を吸収する発色団が含まれている場合、サンプルは熱損傷を受ける可能性があります。
3. 解像度はわずかに低下しますが、共焦点の小さな穴を同時に利用することで改善できますが、信号損失が発生します。
4. 高価な超高速レーザーには限界があるため、多光子走査型顕微鏡のコストは比較的高くなります。
