蛍光顕微鏡の取扱説明書と注意事項

蛍光顕微鏡の取扱説明書と注意事項

蛍光顕微鏡で観察される蛍光画像には、蛍光の色や明るさだけでなく、形態的な特徴も含まれています。総合的な結果を評価するには、両方の要素を組み合わせる必要があります。結果の記録は、オペレーターによる視覚的観察に基づく主観的な指標に依存しており、日常的な定性的観察では一般的に信頼性が高くなります。技術の進歩に伴い、顕微分光光度計や画像分析装置などの対物機器が文書化や評価に使用されることが増えています。それにもかかわらず、これらの機器から得られた結果は依然として主観的な解釈を必要とします。

蛍光顕微鏡による写真撮影は、蛍光画像を記録するために不可欠です。蛍光は急速に減衰するため、結果は速やかに写真撮影する必要があります。この手順は、ASA 200 以上の高速写真フィルムが必要であることを除いて、従来の顕微鏡写真法とほぼ同じです。紫外線は重度の蛍光退色を引き起こします。たとえば、FITC 標識標本は 30 秒間の UV 照射後に蛍光輝度が 50% 失われます。したがって、露出が遅いと蛍光画像を取得できません。ほとんどの研究グレードの蛍光顕微鏡には、半自動または全自動の顕微鏡写真システムが装備されています。

予防

① 蛍光顕微鏡の製造元のマニュアルに従って厳密に操作してください。操作手順を任意に変更しないでください。 ② 観察は暗室で行ってください。暗室に入ったら電源を入れ、高圧水銀ランプを5～15分間点火します。光源が安定し、目が暗闇に完全に慣れてから標本観察を開始してください。

③紫外線から目を守ります。光源を調整するときは保護メガネを着用してください。

④ 各観察セッションの所要時間は 1 ～ 2 時間程度をお勧めします。超高圧水銀ランプは90分を過ぎると徐々に光度が低下し、それに伴って蛍光も弱まります。標本の蛍光も 3 ～ 5 分間の UV 曝露後に顕著に消えます。最大連続観察時間は 2 ～ 3 時間を超えてはなりません。

⑤ 蛍光顕微鏡の光源には寿命があります。時間を節約し、ランプの寿命を延ばすために、バッチで試験片を検査します。暑い環境では電動ファンを使用して放熱してください。ランプ交換後、最初からの使用時間を記録します。ランプが消えた場合は、ランプが完全に冷めるまで待ってから再点火してください。ランプを頻繁に再起動しないでください。

⑥ 時間の経過とともに蛍光は消失しますので、染色直後の染色標本を観察してください。蛍光の減衰を遅らせ、封入剤の蒸発を防ぐために、標本はポリエチレンのビニール袋に入れて 4 度で保存できます。

⑦ 蛍光強度の等級基準：一般的に4段階が採用されています。 「−」：蛍光が無い、または微弱な蛍光しか検出できない 「+」：かろうじて検出できるが、明確な蛍光信号が確認できる 「++」：明るい蛍光が見える