光学顕微鏡用パラフィン切片作成プロセス
より良い鏡像コントラストを得るには、余分な迷光が観察鏡視野または結像領域に入らないようにできる限り遮断する必要があります。 異なる倍率の対物レンズを備えた接眼レンズを通して観察する場合、視野絞りを調整してドッキングまたはわずかに対応する接眼レンズのミラーフィールドを形成できます。 後で; 顕微鏡写真やデジタル CCD イメージングでは、ファインダー枠や CCD イメージング領域に応じて視野絞りを縮小できますが、写真の角が切れるほど絞りすぎないでください。 オイルレンズ使用時も適度にズームアウトできます。
コンデンサー開口数設定
まず、コンデンサーレンズの開口数 (NA) 範囲は、基本的に対物レンズの NA 値と等しく、NA スケールでマークされている必要があります。 高倍率の顕微鏡検査を行うには、上部にオイルを追加する必要があります。 開口コンデンサの機能は、対物レンズの開口数に対応する効果的な集束投影光を提供することです。 集光レンズのNAを対物レンズのNAより大きくすると、光の一部が無駄になってしまいます。 コンデンサーレンズのNAを小さくしすぎると投影光が不足し、出射角の変化により光の一部が標本に対して斜めに照射され回折して見えるようになります。 ミラーリング、どちらもミラーリングの解像度を低下させます。 したがって、対応する特定の設定原則に従う必要があります。 経験値は、顕微鏡検査中に対応する対物レンズの NA の 80--100 パーセント以内に調整することです。 撮影時により適切なコントラストと被写界深度を得るには、60-80 パーセントまたは 70 パーセントに設定することをお勧めします。 - 80 パーセント。 これは、異なる倍率の対物レンズを切り替えるたびに、それに応じた調整を行う必要があることを意味します。 実際には、標本の厚さや染色の深さに応じて微調整することもできます。
カバレッジ補正が不十分で、標準のカバーガラスの厚さは {{0}.17mm、スライドガラスの厚さは 1.0mm です。 規格を満たしていないカバーガラスやスライドガラスの使用、スライスや封入剤の厚さの不均一などによりカバレッジ差が発生し、NA対物レンズに大きな影響を与えます。 鏡像画質。 不十分なカバレッジを修正するために、40x、60x、または 20x 干渉対物レンズ上に補正環 (CC) が設計されています。 補正範囲は一般に0.{8}}.23 mmで、長作動距離の対物レンズは2.0mmに達します。 CC 調整の基本を注意深くマスターする必要があります。そうしないと、特に前の実験者がキャリブレーションを行って次の実験者のサンプル カバレッジが一致しない場合に問題が発生します。 その方法は、
まず CC を選択し、0.17 値のラインを位置決めレチクルに合わせて、鏡像が明確に焦点を合わせられるかどうかを観察します。 鮮明でない場合は、鏡像が最適になるまで CC リングを左右に回転させ、毎回試料を交換してください。顕微鏡検査の品質を確保するには、毎回カバレッジの補正と調整を完了する必要があります。
