蛍光顕微鏡の原理と構造
蛍光顕微鏡は、発光効率の高い点光源を使用し、カラーフィルターシステムを介して特定の波長の光（紫外光3650インチや紫青色光4200インチなど）を励起光として放射し、サンプル中の蛍光物質を励起します。さまざまな色の蛍光を発します。 その後、対物レンズと接眼レンズを拡大して観察します。 このように、弱い蛍光でも、強いコントラストの背景下で容易に認識でき、感度が高く、主に細胞の構造や機能、化学組成の研究に使用されます。 蛍光顕微鏡の基本構成は、通常の光学顕微鏡といくつかの付属品（蛍光光源、励起フィルター、二色光束分離器、ブロッキングフィルターなど）で構成されています。 蛍光光源 - 通常、さまざまな波長の光を放射できる超高圧水銀ランプ (50-200W) が使用されます。 ただし、各蛍光物質には最も強い蛍光を発する励起光の波長があるため、特定の波長の励起光のみを通過させて発光させるには、励起フィルター（通常は紫外、紫、青、緑の励起フィルター）を追加する必要があります。他のすべての光を吸収しながら、標本に照射します。 各物質は励起光が照射されると、ごく短時間のうちに照射よりも長い波長の可視蛍光を発します。 蛍光には特異性があり、一般に励起光よりも弱いです。 特定の蛍光を観察するには、対物レンズの後ろに遮断（または抑制）フィルターを追加する必要があります。 これには 2 つの機能があります。1 つは、接眼レンズに入る励起光を吸収して遮断し、蛍光を妨げたり目に損傷を与えたりするのを防ぐことです。 次に、特定の蛍光を選択して通過させ、特定の蛍光色を表示します。 両方のタイプのフィルターを一緒に使用する場合は選択する必要があります。
蛍光顕微鏡には、光路に基づいて 2 つのタイプがあります。
1. 透過型蛍光顕微鏡：励起光源をコンデンサーを介して試料材料に透過させ、蛍光を励起します。 一般的に使用される暗視野集光器、または通常の集光器を使用して反射板を調整し、励起光と側方光を試料に変換することができます。 比較的昔ながらの蛍光顕微鏡です。 利点は低倍率で蛍光が強いことですが、欠点は倍率が上がると蛍光が弱くなることです。 したがって、より大きな試料材料の観察に適しています。
2. 落射蛍光顕微鏡 現代に開発された新しいタイプの蛍光顕微鏡です。 従来のものとは異なり、照明コンデンサーと蛍光を収集するための対物レンズは同じ対物レンズを使用し、励起光は対物レンズから標本の表面に落ちます。 軽ウランに対して 45 度の角度にある光路に、デュアル カラー ビーム セパレータを追加する必要があります。 励起光は対物レンズに反射され、サンプルに集中します。 試料から発生した蛍光と、対物レンズやカバーガラスの表面で反射した励起光は同時に対物レンズに入射し、ダイクロイックビームセパレータに戻り、励起光と蛍光を分離します。 残留励起はブロッキング フィルターによって吸収されます。 異なる励起フィルター/デュアルカラービームセパレーター/ブロッキングフィルターの組み合わせを使用すると、異なる蛍光反応生成物のニーズを満たすことができます。 この蛍光顕微鏡の利点は、視野照明が均一で、画像が鮮明で、倍率が大きくなるほど蛍光が強くなることです。
