レーザー共焦点顕微鏡と従来の光学顕微鏡の違い

レーザー共焦点顕微鏡と従来の光学顕微鏡の違い

レーザー走査型共焦点蛍光顕微鏡は、コンピューター、レーザー、画像処理技術を使用して生体サンプルの 3 次元データを取得する、比較的高度な分子および細胞生物学の分析機器です。 主に生きた細胞の構造や特定の分子やイオンの生物学的変化の観察、定量分析、リアルタイム定量測定に使用されます。

レーザー共焦点顕微鏡の原理: 光源の後ろに配置された照明ピンホールと検出器の前に配置された検出ピンホールを使用して、点照明と点検出を実現します。 照明ピンホールを通って光源から放射された光は、サンプルの焦点面上の点に焦点を合わせ、この点から放射された蛍光は検出ピンホール上に結像され、この点の外側にある放射光は検出によってブロックされます。ピンホール。 照明ピンホールと検出ピンホールは照射点または検出点と共役であるため、検出点が共焦点点となり、検出点が位置する面が共焦点面となる。

コンピュータは、検出された点を画像点の形式でコンピュータ画面上に表示します。 完全な画像を生成するために、光路内の走査システムがサンプルの焦点面上を走査して完全な共焦点画像を生成します。 ステージが Z 軸に沿って上下に移動する限り、サンプルの新しい層が共焦点面に移動し、サンプルの新しい層がモニター上に画像化されます。 Z 軸の連続的な移動により、サンプルのさまざまな層の連続画像を取得できます。 ライトカットイメージ。

従来の光学顕微鏡の違い

従来の蛍光顕微鏡には、焦点面の外側の蛍光構造がぼやけてぼやけるという、克服できない欠点がありました。 その理由は、ほとんどの生物標本が重複した構造を持っているためです。 蛍光標識された構造が異なるレベルに分布して重なっている場合、焦点面の上または下からの散乱蛍光も対物レンズで受信され、蛍光顕微鏡の解像度が大幅に向上します。 減らす。

レーザー走査型共焦点顕微鏡は、従来の光学顕微鏡に基づいて、光源としてレーザー光を使用し、共役集束の原理と装置を採用し、コンピューターを使用してデジタル画像処理、観察、分析、観察対象の出力を実行します。 サンプルを断層撮影して画像化することで、細胞の三次元空間構造を非破壊で観察および解析できます。 同時に、免疫蛍光標識プローブやイオン蛍光標識プローブを用いて、固定細胞や組織切片の観察だけでなく、生きた細胞の構造、分子、イオン、生命活動などをリアルタイムで動的に観察・検出することができます。 Ca2+、pH値、膜電位、細胞形態の変化などの生理学的シグナルを細胞内レベルで観察することは、形態学、分子細胞生物学、神経科学、薬理学、遺伝学の分野における新世代の強力な研究ツールとなっています。