微生物顕微鏡直接計数法の実験原理
血球計数器を用いた顕微鏡下での直接計数は、微生物を計数するために一般的に使用される方法です。この方法の利点は、直感的で迅速であることです。適切に希釈された細菌懸濁液（または胞子懸濁液）を、血球計数器のスライドとカバーガラスの間の計数チャンバーに入れ、顕微鏡下で計数します。計数チャンバーの容積は固定（0.1 mm2）であるため、顕微鏡下で観察された微生物の数に基づいて、単位容積あたりの微生物の総数に換算できます。この方法は、生菌と死菌の総数を計数するため、総細菌数法とも呼ばれます。
血球計数器は通常、3 つのプラットフォームを形成する 4 つのスロットを備えた特殊なスライドです。中央のプラットフォームは、短い水平の溝によって 2 つに分割されています。プラットフォームの両側には正方形のグリッドが刻まれています。各正方形のグリッドは 9 つの大きな正方形に分割されています。中央の大きな正方形は計数室です。微生物の計数は計数室で行われます。血球計数器の構造を図 Ⅷ-1 に示します。
計数箱の目盛りには、一般的に2つの規格があります。1つは、大きな正方形を16個の中正方形に分割し、各中正方形を25個の小さな正方形に分割したものです（図Ⅷ-2）。もう1つは、大きな正方形の正方形のグリッドを25個の中正方形に分割し、各中正方形を16個の小さな正方形に分割したものです（図VIII-1、C）。ただし、どのような計数箱であっても、各大きな正方形内の小さな正方形の数は同じで、図Ⅷ-2に示すように、16×25=400個の小さな正方形です。
各大きな正方形の辺の長さは 1mm なので、各大きな正方形の面積は 1mm2 です。カバー ガラスを覆った後、スライドとカバー ガラスの間の高さは 0.1mm なので、計数室の容積は 0.1mm3 です。
数えるときは、通常、5 つの中くらいの正方形の中の細菌の総数を数え、次に各中くらいの正方形の平均値を求め、次に 16 または 25 を掛けて大きな正方形の中の細菌の総数を出し、その後、1 ml の細菌溶液の中の細菌の総数に変換します。
