光学顕微鏡の結像光路系の調整と顕微鏡検査の概要
撮像光学系の調整と顕微鏡検査概要
顕微鏡の結像光学系の調整は、さまざまな顕微鏡技術のニーズに応じて行われます。いわゆる顕微鏡検査とは、簡単に言えば、顕微鏡でサンプルを観察するときに使用する照明方法と、サンプルによって形成された画像のコントラストを向上させる技術と方法です。以下では、成熟したいくつかの顕微鏡検査方法と、それに対応する顕微鏡結像光学系の調整方法について簡単に説明します。
1. 透過明視野：
これは、顕微鏡の発明以来、最も伝統的で一般的な適用方法です。基本コンポーネント：a. 対物レンズ：明視野観察には、任意の対物レンズを使用できます。b. スポッティングスコープ：あらゆる種類のスポッティングスコープを使用できますが、絞りが付いている方が望ましいです。調整方法：上記の顕微鏡のクーラー照明システムを調整した後、明視野法を適用できます。適用範囲：すべての染色組織切片、血液塗抹標本など。注意事項：a. 明視野観察法を使用する場合は、クーラー照明システムを調整する必要があります。b. 視野の絞りを勝手に開いてはならず、10×、10×未満、10×を超える対物レンズを使用する場合は、コンデンサーミラーの前面レンズをそれぞれ実際に光路の外側と内側に配置する必要があります。c. コンデンサーミラーの開口絞りは、視野の明るさを調整するために使用しないでください。また、コンデンサーミラーの高さをむやみに調整しないでください。顕微鏡の解像度が低下し、染色された組織の解像度が損なわれます。顕微鏡の解像度と損傷は、クーラー照明システムに合わせて調整されています。d.顕微鏡写真の場合、対物レンズの倍率を変更するたびに、コンデンサーレンズの開口絞りを調整して、そのサイズが対物レンズで使用される開口数の2/3と正確に等しくなるようにする必要があります。
2. 透過光位相差法：
これは、コントラスト強調法の最新の顕微鏡検査です。基本コンポーネント: 位相コントラスト対物レンズ、明視野および位相コントラスト多目的スポッティングスコープ、焦点合わせ望遠鏡、緑色フィルター。
調整方法:
a. クーラー照明システムの調整に基づいて、明視野法を使用してサンプルに焦点を合わせます。
b. スポッティングスコープをPh1に回してダイヤルスケールの位置を合わせ、10×位相差対物レンズを選択し、観察する透明サンプルを交換します。
c. 接眼レンズの 1 つを取り外し、中央に配置された望遠鏡に交換し、視野内の 2 つの位相コントラスト リング (対物レンズの黒い位相コントラスト リングとコンデンサー レンズの光透過位相コントラスト リング) に焦点を合わせます。
d. 視野内の2つの位相差リングは必ずしも一致しない場合があります。スポッティングスコープの2つの調整装置を調整します（位相差リング調整レバーの左右の位置を調整し、摩擦ノブの前後の位置を調整します）。これにより、前後の光透過リングが左右に黒色リングと一致するようになります。
e. 調整後、観察用の接眼レンズに戻し、緑色のフィルターを光路に押し込んでサンプルの位相差画像を観察します。
f. 観察に20倍と40倍の対物レンズを使用する場合は、スポッティングレンズをPh2の位置にセットし、100倍の対物レンズを使用する場合は、スポッティングレンズをPh3の位置にセットします。
適用範囲: あらゆる種類の細胞、生体組織、染色または未染色の組織切片、水生生物など、透明、未染色、または染色されていないサンプルの観察に適しています。
3. 微分干渉位相差法：
位相コントラスト法では、サンプルの詳細を観察する際に画像の周囲にハローが伴い、本来見えるはずの詳細がマスクされてしまうこと、またサンプルまたは組織切片にはかなり薄い厚さが必要で、原理的には 10μm よりも厚くできないことなどの制限を克服するために、二重ビーム干渉の原理を使用して、微分干渉位相コントラスト法を設計します。
調整方法:
a. DIC法は、Kuleminシステムがすでに調整されていることに基づいて調整する必要がある。
b. 10倍対物レンズを使用して、明るい視野でサンプルを鮮明に見ることができる対物レンズの焦点位置を決定します。
c. 偏光子を照明経路に配置します。偏光子が東西方向を向くように注意してください。
d. コンデンサーダイヤルを1×対物レンズの使用に対応する位置、つまりDIC 0.2.4に回します。
e. 10×対物レンズ用のDICスライダーを対物レンズの背面または対物レンズコンバーターに挿入します。
f. アナライザーをイメージング光学パスに挿入し、その向きが南北になるように注意してください。
g. 観察する透明サンプルを交換し、光源をオンにしてサンプルに焦点を合わせます。
h. 微分干渉コントラスト画像が最良の効果、つまり最も顕著なレリーフ効果を達成するように、DIC インサートを調整します。
i. 同時に、コンデンサーミラーの絞りを調整して、コントラストの効果も最適になるようにします。
j. 次に、サンプルの詳細を微調整して、さまざまなレベルでのサンプルの構造を確認します。
k. 補色（一次赤色遅延板）を挿入し、同時に DIC インサートを調整すると、視野内に赤、オレンジ、黄色、緑、青、紫、ピンク、ピンク紫、黄金色の絶えず変化する鮮やかな色を見ることができます。適用範囲: 透明または染色できない組織切片、厚さ約 100 µm まで、培養中の生組織および生細胞、小型生物など。
