組織ブロックの体積に関する生体顕微鏡検査
生物顕微鏡 これまでのところ、冷固定、凍結超薄切片、および凍結乾燥は、組織および細胞の X 線顕微鏡切片の日常的な方法です。 この方法の詳細は次のように説明されます。
コンデンサー付きの生物顕微鏡の場合、コンデンサーを上下に動かして適度な明るさを調整することができ、可変光の絞りも変更して9b程度の適度な明るさを実現することができます。 晴れていれば、コンデンサーを適切に持ち上げることができ、可変光源の口径を適切に拡大することができる。 光が強すぎる場合には、集光レンズを適切に下げて、交差する光の絞りを適切に絞ることができる。 この場合でもまぶしさを感じる場合は、適切なフィルターを選択し、コンデンサーの下のブラケットに配置します。 このオークなら満足のいく輝きが得られるでしょう。 もちろん、コンデンサーの上下位置の調整、可変光学読み取りの開口サイズの調整、および適切なフィルターの選択には、ある程度の経験を積むための練習が必要です。
生物顕微鏡において非常に重要な問題は、細胞のサンプリングと分離のプロセス、凍結乾燥と樹脂包埋（FD）後、極薄凝集体の凍結後、凍結乾燥後の各部分の 65 種類の元素の含有量です。慎重に扱わなければなりません。 分析対象の細胞にダメージを与えることはできません。 なぜなら、X線微量分析には多くの工程が必要なだけでなく、多額の費用もかかるからです。 分析された細胞が、長時間および多段階の処理を経て損傷した細胞または死んだ細胞である場合、誤った結論を導き出すことは非常に残念です。 例えば、コラゲナーゼ処理により分離された心筋細胞は、長い棒状と円形の２つの形状を有する。 後者は、細胞分離中に損傷を受けて死にかけている細胞です。
生体顕微鏡検査 これら 2 種類の細胞内の電解質の量と分布はまったく異なります。 円形心筋細胞ではNaが非常に高く、Kが非常に低く、線虫ではca濃度が非常に高い。 他の分析法で確認した結果、円形細胞の高Na、低K、およびミトコンドリアの高Caは、細胞分離過程での細胞膜の損傷によるものであることが証明されました。 細胞や組織の氷冷固定法は、通常、最初に急冷して固定し、次に液体窒素中で保存します。 焼入れ固定は保存効果にとって非常に重要です。 生きた細胞や新鮮な組織には水分が豊富に含まれています。 急冷する場合、破砕された冷媒と直接接触する細胞または組織の部分（特に液体窒素で急冷する場合）が最初に凍結して固定されることが多く、その結果、「シェル」が形成され、これが妨げになります。破砕して冷間固定したもの。 したがって、X 線微小領域解析を行うと、大きなセルの中心に氷の結晶があることがよくわかります。 これを防ぐために、分解冷媒として液体窒素よりも融点が高く、806cよりも低い物質が使用されます。 このような物質は数多くありますが、最も安価なものは濃プロパン（沸点- 42.120c、融点- 187.10c、分子量44.1）であり、冷却速度が最も速いです。 しかし、可燃性であるという欠点があります。
生物顕微鏡では、筋線維を特別なラックに置くことができるため、筋線維の収縮が特定の段階に達し、固定する必要がある場合、すぐにノズルを起動して液体プロパンを筋線維に噴霧し、筋線維を急冷して固定します。 次に、筋肉繊維をフレームごと取り出し、液体窒素の中に入れました。 血球または単離細胞を固定する場合は、まず低速で遠心分離して細胞を濃縮し、熱伝導率の良い銀製バイアルに細胞を移し、バイアルを液体プロパンに入れて凍結させて固定します。 ホール実験室でラットの膵臓を固定するとき、2 つの鋼製ブロックを液体ヘリウム (または液体窒素) で事前に冷却し、2 つの銅製ブロックを鉗子でクランプし、膵臓の前面と背面に配置して急冷して固定しました。膵臓。 組織や細胞は、急冷して固定した後、液体窒素中で長期保存できます。
生物顕微鏡 最も評判の高い凍結超薄切片法に加えて、科学者が使用する別の堆積法があります。 分析前に物質を添加して分析対象成分を沈殿させて固定化し、その沈殿を分析します。 たとえば、筋肉細胞に ca を沈着させるためにシュウ酸塩やピロアンチモン酸塩がよく使用されます。 前者は、細胞質内の低濃度の Ca に対して十分な感度がありません。 ピロアンチモン酸はより感受性が高く、脳内に遊離 Ca を含む電子密度の高い沈着物を形成する可能性がありますが、ピロアンチモン酸はナトリウム、マンガン、バリウム、鉄とは適合しません。沈着物も形成され、特異性が低くなります。 標本調製プロセスは、通常の透過型電子顕微鏡超薄切片標本の調製と同様ですが、違いは、固定前に 3% ピロアンチモン酸カリウム (リン酸緩衝生理食塩水、pH 7.6) で 6 時間固定し、染色された筋肉超薄切片上で、各サルコメアのバンド A およびバンド 2 の正中線に黒い沈着物が見られ、染色されていない切片を X 線微量分析に使用しました。 ヘム含有物質などの沈殿にはジアミノベンジジン四塩酸塩（DAB）を使用しました。 組織化学的沈殿反応と X 線微小分化ブリッジの組み合わせは、凍結超薄切片条件を持たない研究室で検討できます。 分析対象元素のピーク高さに応じて半定量が可能
