蛍光顕微鏡と従来の光学顕微鏡の比較と特徴
蛍光顕微鏡は通常の光学顕微鏡とは異なります。従来の光源による照明下で標本を観察するのではなく、特定の波長の光（通常は紫外光または青紫光）を使用して標本内の蛍光物質を励起し、蛍光を発させます。したがって、蛍光顕微鏡の光源は直接照明には使用できません。これは、標本内の内因性蛍光物質を励起するエネルギー源として機能します。私たちは光源からの光ではなく、標本中の蛍光物質が励起光を吸収して発する蛍光によって標本を観察することができます。
したがって、蛍光顕微鏡の重要な特徴は、特定の波長範囲内の豊富な励起光を供給して、試験片内の蛍光物質に十分な励起強度を提供できる光源です。一方、蛍光顕微鏡には対応するフィルターシステムが装備されている必要があります。蛍光組織化学に必須のツールとして、主に超高圧光源、フィルターセット（励起フィルター、バリアフィルターを含む）、光学系、撮影系で構成されています。特定の波長の光で標本を励起して蛍光を発生させることで機能します。
蛍光励起法：波長域によりUV励起（紫外照明法）とBV励起（青紫光法）に分類されます。 UV 励起では、400 nm より短い近紫外光を励起に使用します。可視励起光が関与しないため、観察される蛍光は色素の固有の蛍光を示します。これにより、標本上の特定の蛍光を背景組織の自己蛍光から区別することが容易になります。
BV励起法：404nm、434nmを中心に紫外光から青色光までの光で励起します。この方法では青色光が標本に照射されるため、蛍光観察システムのカットフィルターは青色光を完全に遮断し、必要な緑色と黄色の蛍光を十分に透過させる必要があります。この方法は、蛍光抗体法で使用される蛍光色素に応用されています。励起光の最大吸収波長と蛍光の最大発光波長は比較的近いため、BV励起にはシャープカットフィルターが必要です。ここでは励起光として青色光を使用しているため、蛍光色素の吸収効率が高く、より明るい画像が得られます。欠点は、500 nm 未満の蛍光は検出できず、500 nm を超える信号は画像全体に黄色の色合いを与えることです。蛍光抗体アッセイでは、特異性は主に蛍光色素の特徴的な色によって判断されます。したがって、微妙な特異性を評価する場合、BV 励起法の上記の欠点が重大な影響を与える可能性があります。
