暗視野顕微鏡の原理と動作

暗視野顕微鏡の原理と動作

① 暗視野顕微鏡には、コンデンサーの中心に不透明な絞りがあります。直接照明光が対物レンズに入射するのを防ぎます。試料によって反射および回折された光のみが収集されます。その結果、視野の背景は暗く見えますが、標本の端は明るくなります。この顕微鏡は、通常の明視野顕微鏡よりも最大 50 倍高い解像度で 4 ～ 200 nm の微粒子を観察できます。

② 原理 暗視野顕微鏡は、チンダル効果に基づいて従来の光学顕微鏡を改良したものです。暗視野コンデンサーは光源からの中央ビームを遮断し、光が標本を通って対物レンズに向かって真っすぐ上に進まないようにします。代わりに、光は試料を斜めから照らすようにそらされます。標本は入射光を反射または散乱させ、散乱光は対物レンズに入り、視野全体に暗い背景を作り出します。

③ 適用範囲 暗視野顕微鏡は、染色されていない透明な標本の観察によく使用されます。このような標本は周囲の媒質の屈折率に近い屈折率を持っており、通常の明視野照明下では区別することが困難です。暗視野照明により、標本と背景の間のコントラストが向上します。 4 ～ 200 nm までの粒子を検出できます。しかし、それは物体の存在、動き、表面の特徴を示すだけであり、物体の微細な内部構造を解明することはできません。

④ 操作手順

(1) 暗視野コンデンサーを顕微鏡のコンデンサーホルダーに取り付けます。

(2) 明るい光源を使用してください。対物レンズに直接光が入らないようにしてください。通常は専用の顕微鏡ランプが使用されます。

(3) コンデンサーと標本スライドの間にシダーオイルを一滴置きます。これにより、コンデンサー表面での光の全反射が防止されます。そうしないと、暗視野観察で試料を照明できなくなる可能性があります。

(4) コンデンサーを上げたり下げたりして、円錐形の光線を試料に焦点を合わせます。コンデンサーに水平移動およびセンタリング制御が装備されている場合は、最初にセンタリングを実行して、コンデンサーの光軸を顕微鏡の光軸と正確に合わせます。 (5) コンデンサーに合わせた対物レンズを選択し、焦点を調整し、目的の標本像を視野に入れます。