微生物数の測定～顕微鏡直接計数法！
細菌集団の増殖は、細胞数の増加または細胞物質の増加として現れます。細胞数を決定する方法には、直接顕微鏡カウント、プレートカウント、分光光度計による濁度推定、最確数MPN、膜ろ過（膜ろ過）などがあります。細胞物質を測定する方法には、細胞乾燥重量の測定、窒素含有量、RNAおよびDNA含有量などの特定の細胞成分の測定、代謝産物の測定などがあります。つまり、微生物の増殖を測定する方法は多数あり、それぞれに長所と短所があります。作業の特定の要件に応じて方法を選択する必要があります。この実験では、主に生産および科学研究作業で一般的に使用される顕微鏡直接カウント方法を紹介します。
1. 目的要件
1. 血球計数ボードを使った計数の原理を明確にする。
2. 血球計数ボードを使用して微生物を計数する方法を習得します。
2. 基本原則
顕微鏡直接計数法は、検査するサンプルの懸濁液を、面積と体積が決まった専用のスライド（バクテリオメーターとも呼ばれる）に少量置き、顕微鏡下で直接計数する、シンプルで迅速かつ直感的な方法です。 現在、国内外で一般的に使用されているバクテリオメーターには、血球計、ピーターオフハウザーバクテリオメーター、ホークスレーバクテリオメーターなどがあります。 それらはすべて、酵母、細菌、カビの胞子、その他の懸濁液を計数するために使用でき、基本的な原理は同じです。 後者の2つの細菌カウンターは、カバーガラスで覆われた後の総体積が0.02mm3であり、カバーガラスとスライドの間の距離はわずか0.02mmです。 そのため、油浸対物レンズを使用して、細菌などのより小さな細胞を観察および検出できます。 カウント。 これらの細菌計数器を使用するほかに、顕微鏡下で塗抹面積と視野面積の比率を直接観察する推定法もある。この方法は、牛乳の細菌検査に一般的に使用されている。顕微鏡直接計数法の利点は、直感的で、操作が速く、簡単なことである。しかし、この方法の欠点は、測定結果が通常、死菌と生菌の合計になることである。現在、この欠点を克服する方法はいくつかあり、生菌染色マイクロチャンバー培養（短時間）と細胞分裂阻害剤の添加を組み合わせて、生菌のみを計数するという目的を達成するなどである。
この実験では、血球計数を例として顕微鏡下で直接計数します。他の 2 つの細菌計数器の使用については、各メーカーの説明書を参照してください。血球計数器を使用した顕微鏡下での直接計数は、一般的に使用されている微生物計数方法です。計数板は、3 つのプラットフォームを形成する 4 つの溝を備えた特殊なスライドです。中央の広いプラットフォームは、短い水平溝によって 2 つの半分に分割され、プラットフォームの両側にグリッド グリッドがあります。各正方形グリッドは 9 つの大きな正方形に分割され、中央の大きな正方形が計数室です。血球計数板の構造を図 {{0}} に示します。計数室のスケールには、一般に 2 つの仕様があります。1 つは、大きな正方形が 25 個の中サイズの正方形に分割され、各中サイズの正方形が 16 個の小さな正方形に分割されています (図 15-2)。もう 1 つは、大きな正方形です。正方形のグリッドは 16 個の中サイズの正方形に分割され、各中サイズの正方形は 25 個の小さな正方形に分割されています。 しかし、どんな種類の血球計数板であっても、各大きな正方形の中には 400 個の小さな正方形があります。各大きな正方形の辺の長さは 1mm で、各大きな正方形の面積は 1mm2 です。カバーガラスをかぶせた後、カバーガラスとスライドの間の高さは 0.1mm なので、計数室の容積は 0.1mm3 (1 万分の 1 ミリリットル) です。図 15-1 血球計数板の構造 (1) 図 15-2 血球計数板の構造 (2) A. 正面図、B. 縦断面、拡大した正方形のグリッド、中央の大きな正方形が計数室です 1. 血球計数板、2. カバーガラス、 3. 計数室で計数する場合、通常は 5 つのマス目にある細菌の総数を数え、各マス目の平均値を求め、25 または 16 を掛けて、大きなマス目にある細菌の総数を 1ml の細菌溶液に含まれる細菌の総数に変換します。 中央の 5 つのマス目にある細菌の総数を A、細菌溶液の希釈係数を B とします。 中央のマス目が 25 個の計数皿の場合、細菌溶液 1mL に含まれる細菌の総数は=A/5×25×104× B=50000A·B (個) 同様に、マス目が 16 個の計数皿の場合、細菌溶液 1mL に含まれる細菌の総数は =A/5×16×104×B=32000A·B (個)、、
