蛍光顕微鏡は光路に基づいて 2 つのタイプに分類されます。
1. 透過型蛍光顕微鏡：励起光源を用いて、集光レンズを通って標本材料を通過することにより蛍光を励起します。一般的に使用される暗視野集光器も使用でき、通常の集光器を使用して反射板を調整して励起光を試料上にリダイレクトおよびサイドローブすることができます。これは比較的昔ながらの蛍光顕微鏡です。-低倍率で蛍光が強いのが利点ですが、倍率が上がると蛍光が弱くなるのが欠点です。したがって、より大きな試料材料の観察に適しています。
2. 落射蛍光顕微鏡は、現代に開発された新しいタイプの蛍光顕微鏡です。上記とは異なり、照明コンデンサーと蛍光集光用の対物レンズは同じ対物レンズを使用し、励起光は対物レンズから下方に試料表面に照射されます。デュアルカラービームスプリッターを光路に追加する必要があり、光路は軽ウランから 45 度離れています。角度、励起光は対物レンズに反射され、サンプルに焦点を合わせます。試料から発生した蛍光と、対物レンズやカバーガラスの表面で反射した励起光は対物レンズに入り、デュアルカラービームスプリッターに戻り、励起光と蛍光を分離します。その後、残留励起光はブロッキングフィルターによって吸収されます。励起フィルター/二色ビーム分離器/遮断フィルターのさまざまな組み合わせを使用すると、さまざまな蛍光反応生成物のニーズを満たすことができます。この蛍光顕微鏡の利点は、均一なフィールド照明、鮮明なイメージング、および倍率が高くなるほど強い蛍光が得られることです。
(2) 蛍光顕微鏡の使用上の注意
1. 光源をオンにします。超高圧水銀ランプを最大の明るさにするには、数分間予熱する必要があります。-
2. 透過型蛍光顕微鏡では、光源とコンデンサーの間に必要な励起フィルターを設置し、対物レンズの後ろに対応する遮断フィルターを設置する必要があります。落射蛍光顕微鏡では、必要な励起フィルター/デュアルカラー ビーム スプリッター/ブロッキング フィルター ブロックを光路のスロットに挿入する必要があります。
3. 低倍率の顕微鏡で観察し、さまざまな種類の蛍光顕微鏡の調整装置に従って光源の中心を調整し、照明スポット全体の中心に位置するようにします。
4. 標本を置き、焦点を合わせて観察します。使用中に注意が必要です: 目の損傷を避けるため、フィルターを取り付ける前に目で直接観察しないでください。油顕微鏡で標本を観察する場合は、非蛍光の特殊な油顕微鏡を使用する必要があります。高圧水銀ランプは一度消灯すると、すぐに再点灯することはできません。-再起動には 5 分かかります。再起動しないと不安定になり、水銀ランプの寿命に影響します。
(3)青紫光フィルターを使用した教示台上の蛍光顕微鏡で観察すると、0.01%アクリジンオレンジ蛍光色素で染色された細胞が確認できます。核と細胞質は励起されて、2 つの異なる色の蛍光 (暗緑色とオレンジ赤色) を生成します。
