蛍光顕微鏡と共焦点レーザー顕微鏡の違い

蛍光顕微鏡と共焦点レーザー顕微鏡の違い

蛍光顕微鏡
1. 蛍光顕微鏡は、紫外線を光源として検査対象物を照らし、蛍光を発させ、顕微鏡下で対象物の形状と位置を観察します。蛍光顕微鏡は、細胞内の物質の吸収と輸送、化学物質の分布と配置を研究するために使用されます。細胞内の一部の物質、例えばクロロフィルは、紫外線を照射すると蛍光を発することができます。また、物質自体は蛍光を発しないが、蛍光染料または蛍光抗体で染色すると、紫外線を照射すると蛍光を発することができます。蛍光顕微鏡は、そのような物質の定性的および定量的研究のためのツールの1つです。

2. 蛍光顕微鏡の原理：
(A) 光源：光源はさまざまな波長（紫外線から赤外線まで）の光を放射します。
(B) 励起フィルター光源: 標本の蛍光を発する特定の波長の光を透過し、蛍光を刺激するのに役立たない光を遮断します。
(C) 蛍光標本：一般的に蛍光色素で染色されます。
（D）ブロッキングフィルター：標本に吸収されない励起光を遮断し、蛍光を選択的に透過します。蛍光のいくつかの波長も選択的に透過します。紫外線を光源として、照射された物体に蛍光を発させる顕微鏡。電子顕微鏡は、1931年にドイツのベルリンでクノールとハロウスカによって初めて組み立てられました。この顕微鏡は、光線の代わりに高速電子ビームを使用します。電子の流れの波長は光の波長よりもはるかに短いため、電子顕微鏡の倍率は800,000倍に達し、最小解像度の限界は0.2ナノメートルです。1963年に使用され始めた走査型電子顕微鏡により、物体の表面の微細な構造を見ることができます。

3. 適用範囲：小さな物体の画像を拡大するために使用されます。一般的には生物学、医学、微小粒子などの観察に使用されます。

共焦点顕微鏡
1. 共焦点顕微鏡は、反射光の光路に半反射半レンズを追加し、レンズを通過した反射光を他の方向に屈折させます。焦点にはピンホールのあるバッフルがあり、ピンホールは焦点にあります。バッフルの後ろの焦点には光電子増倍管があります。検出光の焦点の前後の反射光がこの共焦点システムを通過し、小さな穴に焦点を合わせることができず、バッフルによってブロックされることが想像できます。したがって、光度計が測定するのは、焦点での反射光の強度です。

2. 原理：従来の光学顕微鏡はフィールド光源を使用し、試料上の各点の画像は隣接する点からの回折または散乱光によって干渉されます。レーザー走査型共焦点顕微鏡は、レーザービームを使用して照明ピンホールを介して点光源を形成し、試料の内部を照らします。焦点面の各点がスキャンされ、試料上の照明点が検出ピンホールで画像化されます。検出ピンホールは、検出ピンホールの後ろにある光電子増倍管（PMT）または冷結合装置（cCCD）によって点ごとまたは線ごとに受信され、コンピューターのモニター画面にすばやく蛍光画像が形成されます。照明ピンホールと検出ピンホールは、対物レンズの焦点面に対して共役です。焦点面上の点は、照明ピンホールと発光ピンホールに同時に焦点を合わせます。焦点面の外側の点は、検出ピンホールで画像化されません。これは、共焦点画像が試料の光学断面であり、通常の顕微鏡のぼやけた画像の欠点を克服することで得られます。

3. 応用分野：医学、動植物科学研究、生化学、細菌学、細胞生物学、組織発生学、食品科学、遺伝学、薬理学、生理学、光学、病理学、植物学、神経科学、海洋生物学、材料科学、電子科学、機械工学、石油地質学、鉱物学など。