レーザー走査型多光子顕微鏡の利点の強化
レーザー走査型多光子顕微鏡は光学顕微鏡の大幅な改良であり、主に生細胞、固定細胞、組織の深部構造を観察し、鮮明で鮮明な多層 Z 面構造、つまり光学スライスを取得できる能力に現れています。試験片の三次元固体構造を構築するために使用されます。共焦点顕微鏡では、レーザー光源を使用します。レーザー光源は、対物レンズの焦点面全体を満たすように拡大され、その後、対物レンズのレンズ系を通じて標本の焦点面上の非常に小さな点に収束します。対物レンズの開口数によると、明るい照明点の直径は約 0.25-0.8 μ m、深さは約 0.{{7} }.5μm。共焦点のサイズは、顕微鏡の設計、レーザー波長、対物レンズの特性、走査ユニットの状態設定、および試料の特性によって決まります。共焦点顕微鏡の照明は焦点面上の焦点に焦点を合わせますが、顕微鏡の照明範囲と被写界深度は広いです。共焦点顕微鏡の基本的な利点は、厚さが約 0.5 ～ 1.5 μ m の厚い蛍光標本 (最大 50 μ m 以上) に対して微細な光学的切片を作成できることです。一連の光学スライス画像は、顕微鏡の Z 軸ステッピング モーターを使用して標本を上下に移動させることによって取得できます。画像情報の収集は、試料上の他の位置から発せられる信号からの干渉を受けることなく、 * * 平面内で制御されます。バックグラウンド蛍光の影響を除去し、信号対雑音比を高めた後、共焦点画像のコントラストと解像度は、従来のフィールド照明蛍光画像と比較して大幅に向上しました。多くの標本では、複雑な構造コンポーネントが絡み合って複雑なシステムを形成していますが、十分な光学切片を収集できれば、ソフトウェアを使用してそれらを 3 次元で再構成できます。この実験方法は、細胞または組織間の複雑な構造的および機能的関係を解明するために生物学研究で広く使用されています。
