微生物顕微鏡直接計数
実験原理
血球計数器を使用した顕微鏡下での直接計数は、一般的に使用される微生物計数方法です。 この方法の利点は、直感的で高速であることです。 適切に希釈した細菌懸濁液 (または胞子懸濁液) を血球計数器のスライドとカバー ガラスの間の計数チャンバーに置き、顕微鏡下で計数します。 計数室の容積は一定（0.1mm2）なので、顕微鏡で観察される微生物の数に応じて、単位容積あたりの微生物の総数に換算できます。 生菌と死菌の合計を計数する方法であるため、総菌数法とも呼ばれます。
血球計数器は通常、4 つの溝が 3 つのプラットフォームを形成する特別なガラス スライドです。 中央のプラットフォームは短い水平溝によって 2 つの半分に分割されています。 プラットフォームの両側にグリッドが刻まれています。 各グリッドは 9 つの大きな正方形に分割されます。 中央の大きな広場は計数室です。 微生物は計数室で計数されます。
計数室の規模には一般に 2 つの仕様があります。1 つは、大きな正方形が 16 個の中正方形に分割され、各中央正方形が 25 個の小さな正方形に分割されることです (図 Ⅷ-2)。 もう 1 つは大きな正方形です。この正方形は 25 個の中央の正方形に分割され、各中央の正方形は 16 個の小さな正方形に分割されます (図 Ⅷ-1、C)。 しかし、どのような種類の計数盤であっても、各大きな正方形に含まれる小さな正方形の数は同じです。つまり、16×25=400個の小さな正方形です。
大正方形の一辺の長さは 1 mm、大正方形の面積は 1 mm2 です。 カバー ガラスをかぶせた後のスライド ガラスとカバー ガラスの間の高さは 0.1 mm であるため、計数室の容積は 0.1 mm3 になります。
数を数えるときは、通常、中央の 5 つの正方形の細菌の総数を数え、中央の各正方形の平均値を取得し、16 または 25 を掛けて大きな正方形の細菌の総数を取得し、次に換算します。 1mlの細菌溶液中の細菌の総数。
研究所の備品
血球計、顕微鏡、カバースリップ、滅菌毛細管;
実験材料
出芽酵母懸濁液
実験手順（微生物顕微鏡直接計数法）
1. 希釈
Saccharomyces cerevisiae 懸濁液を適切に希釈します。 菌液が濃くない場合は希釈する必要はありません。
2. 顕微鏡計数室
サンプルを追加する前に、計数プレートの計数チャンバーの顕微鏡検査を実行します。 汚れがある場合は、カウントする前に掃除する必要があります。
3. サンプルを追加する
清潔で乾燥した血球計算板プレートをカバー ガラスで覆い、滅菌細口スポイトを使用して、希釈したサッカロマイセス セレビシエ溶液をカバー ガラスの端から少量（多すぎないように）滴下します。隙間に沿って隙間に近づいています。 毛細管浸透はそれ自体で計数チャンバーに入り、一般的な計数チャンバーは細菌の液体で満たされる可能性があります。 気泡が入らないように注意してください。
4. 顕微鏡の数
5 分間休んだ後、血球計数器を顕微鏡のステージに置き、最初に低倍率レンズを使用して計数室の位置を見つけ、次に高倍率レンズに切り替えて計数します。 計数前に菌液が濃すぎる、または薄すぎることが判明した場合は、計数前に再度希釈を調整する必要があります。 一般的なサンプルの希釈には約
5-10 セルが適切です。 各計数チャンバーは、計数のために中央の 5 つのグリッド (オプションで 4 つの隅と中央のグリッド) 内の細菌を選択します。 グリッド線上の細菌は通常、上部と右側の線のみでカウントされます。 酵母の出芽の場合、出芽体の大きさが母細胞の半分に達した時点で菌数を2個数えます。 サンプルを計数し、2 つの計数チャンバーで計数された値からサンプルの細菌含有量を計算します。
5. 血球計数器のクリーニング
使用後は蛇口の血球計数プレートを水流で洗い流し、硬いもので洗わないでください。洗浄後はご自身で乾燥させるか、ヘアドライヤーで乾燥させてください。 顕微鏡検査では、各細胞内に細菌やその他の沈殿物が残っているかどうかを観察します。 汚れがひどい場合は、きれいになるまで繰り返し洗う必要があります。
