光学顕微鏡のスライドガラスの厚さ要件
顕微鏡による脱水とサンプルの付着: 遠心分離を繰り返すと細胞が失われるため、光学顕微鏡用のスライドガラスまたはプラスチックシートの表面に細胞を付着させ、細胞がガラスと一緒に脱水および乾燥されるようにするのが最善です。スライドまたはプラスチックシート。 光学顕微鏡におけるスライドガラスの厚さの要件 細胞をスライドガラスまたはプラスチックシートに付着させるには、まずスライドガラスまたはプラスチックシート上にフィルムの層を置く必要があります。 フィルムの貼り方は以下の通りです。
(1) 光学顕微鏡の最も簡単な方法は、ポリビニル ホルマール (ホルムバール) フィルムの薄層を置くことです。 洗浄したスライドを (0.5-1) パーセントのポリビニルホルマールクロロホルム溶液に浸します。 雰囲気が揮発すると、スライド上に白い膜が現れます。 クロロホルム中でスライドを数回振ってフィルムを変化させます。 薄くてすぐに使えます。
(2) 0.1 緯度のポリ-L-リジン (調製時に 1 mg のポリリジンを 1 ml の濾過水に溶解) を洗浄したスライドガラス上に滴下し、液滴が広がった後、45℃ の供給ボックスに入れます。 。 ドライ。 ポリ-L-リジンは正に帯電し、より多くの表面に負に帯電した細胞が付着できるため、この方法が最適です。
(3) スライドの厚さに対する光学顕微鏡の要件に従って、血漿とグリセロールを (30--40) パーセントと (3-5) パーセントの比率で蒸留水に加え、グリセロールタンパク質を形成します。解決。 液体を洗浄したスライドガラス上に滴下し、光学顕微鏡下で広げて乾燥させます。 敷いたタンパク質フィルムを 2 パーセントのグルタルアルデヒドに浸漬してタンパク質を固定し、後で使用するために洗浄および乾燥させます。 使用前に、血漿をタンパク質フィルム上に滴下し、「活性化」させ、30分後に緩衝液ですすぐと、直接適用できます。
固定および洗浄された細胞は、デジタル顕微鏡下で濾過水で適切な濃度の細胞懸濁液とし、光学顕微鏡を膜で覆われたスライドガラスまたはプラスチックシート上に置き、湿気の少ない低温の場所に置きます。温度 (40C) 環境 (30-120) 分間放置すると、細胞が膜に付着します。 細いピンセットを使用してスライドガラスを持ち上げ、きれいな再蒸留水中で振り、光学顕微鏡で付着していない細胞を洗い流します。 光学顕微鏡のスライドの厚さの要件 次に、偏光顕微鏡を 50% のアセトン (またはエタノール) で満たされた容器に素早く置きます。 脱水プロセスでは、スライドを 3 分ごとに濃度を増加させながらアセトンまたはエタノールに入れ、光学顕微鏡またはスライドガラス容器内の脱水剤の濃度を連続的に増加させます。 著者の研究室での経験によれば、後者の操作の方が便利です。 光学顕微鏡の具体的な方法では、容器内の脱水剤の半分を 3 分ごとに吸い出し、その後同量の濃度 100% の脱水剤を追加します。 5-6 操作後、顕微鏡容器内の脱水剤の濃度は 0.5% 以上に達し、細胞は正常に脱水されます。 臨界点乾燥後、金属コーティング用の導電性接着剤を使用して、スライドガラスまたはプラスチックシートをサンプルピアに接着します。 3 番目の方法で敷設された膜に細胞を付着させるのにも便利です。 光学顕微鏡は、低濃度のグルタルアルデヒドによって固定された細胞を「活性化」タンパク質フィルム上に吊るすことができます。 光学顕微鏡では、厚さのスライドガラスを 10 分間置き、スライドガラスまたはプラスチックシートを 2 パーセントのグルタルアルデヒドに浸す必要があります。 30分後、濾過した再蒸留水でリンスし、脱水、乾燥し、上記の方法に従ってメタルコートします。
