電子顕微鏡用生体サンプルの調製と観察
顕微鏡の解像度は、使用する光の波長によって異なります。 1933年に登場した電子顕微鏡は、可視光よりもはるかに短い波長の電子線を光源としたため、光学顕微鏡に比べて大幅に高い分解能を実現しました。光源の違いにより、電子顕微鏡と光学顕微鏡の一連の違いも決まります。
電子線イメージングの原理と電子線が試料に作用する仕組みの違いに基づいて、現代の電子顕微鏡は多くの種類に発展しました。現在、最も一般的に使用されているのは透過型電子顕微鏡と走査型電子顕微鏡です。前者は合計倍率が 1000 ～ 10000000 倍の間で変化することができ、後者は合計倍率が 20 ～ 300000 倍の間で変化することができます。この実験では主に、透過型電子顕微鏡と走査型電子顕微鏡の2種類の顕微鏡サンプルの作製について紹介します。
2、設備
1. 大腸菌株が傾いている。
2. 溶液または試薬: 酢酸ペンチル、濃硫酸、無水エタノール、滅菌水、2% リンタングステン酸ナトリウム (pH 6.5 ～ 8.0) 水溶液、0.3% ポリビニルホルムアルデヒド (クロロホルムに溶解) 溶液、シトクロム c、酢酸アンモニウム、プラスミド pBR322。
3. 機器またはその他のツールには、通常の光学顕微鏡、銅ネット、磁器漏斗、ビーカー、ペトリ皿、滅菌スポイト、滅菌ピンセット、ピン、スライドガラス、計数プレート、真空コーティング機、臨界点乾燥機などが含まれます。
3、操作手順
(1) 透過型電子顕微鏡用サンプルの調製と観察
1. 金属メッシュの処理
光学顕微鏡のサンプルはスライドガラス上に置かれて観察されます。しかし、透過型ミラーでは電子がガラス板を透過できないため、キャリアとしては一般にキャリアメッシュと呼ばれるメッシュ素材しか使用できません。キャリアメッシュは材質や形状の違いにより様々な仕様に分かれますが、200～400メッシュ（孔数）の銅メッシュがよく使われます。銅メッシュは使用前に処理して汚れを取り除き、清潔に保つ必要があります。そうしないと、支持フィルムの品質と標本写真の鮮明さに影響を与えます。今回の実験で使用した400メッシュの銅メッシュは、酢酸ペンチルに数時間浸漬・浮かせた後、蒸留水で数回洗浄し、最後に無水エタノールに浸漬・浮かせて脱水する方法で処理できます。上記の方法を行っても銅メッシュがまだきれいでない場合は、希濃硫酸 (1:1) に 1 ～ 2 分間浸すか、1% NaOH 溶液で数分間煮沸し、蒸留水で数回洗浄し、後で使用するために無水エタノールで脱水します。
