蛍光顕微鏡の原理と応用
(1) 蛍光顕微鏡の原理と構造的特徴：蛍光顕微鏡は、発光効率の高い点光源を使用し、フィルターシステムを通して特定の波長の光（紫外光 3650 インチや紫青色光 4200 インチなど）を放射します。試料を励起する励起光として。 内部の蛍光体がさまざまな色の蛍光を発した後、対物レンズと接眼レンズを拡大して観察します。 このように、強いコントラストの背景の下では、蛍光が非常に弱い場合でも、識別が容易であり、感度が高くなります。 主に細胞の構造と機能、化学組成の研究に使用されます。 蛍光顕微鏡の基本構成は、通常の光学顕微鏡にいくつかの付属品（蛍光光源、励起フィルター、2色ビームスプリッター、ブロッキングフィルターなど）を加えたものです。 蛍光光源 - 一般的には超高圧水銀ランプ（50-200W）が使用され、さまざまな波長の光を発することができますが、各蛍光物質には最も強い蛍光を発する励起波長があるため、蛍光灯を追加する必要があります。励起フィルター（一般に、紫外、紫、青、緑の励起フィルターがあります）は、特定の波長の励起光のみを通過させて試料に照射し、他の光を吸収します。 各物質は励起光を照射されると、ごく短時間のうちに照射波長よりも長波長の可視蛍光を発します。 蛍光は特異的であり、一般に励起光よりも弱いです。 特定の蛍光を観察するには、対物レンズの後ろに遮断（または抑制）フィルターが必要です。 これには 2 つの機能があります。1 つは、蛍光を妨げて目に損傷を与えないように、接眼レンズに入る励起光を吸収して遮断することです。 もう 1 つは、特定の蛍光を選択して通過させ、特定の蛍光色を示すことです。 2 つのフィルターは一緒に使用する必要があります。
蛍光顕微鏡には、光路の点から 2 つのタイプがあります。
1. 透過型蛍光顕微鏡: 励起光源は、集光レンズを介して標本材料を通して蛍光を励起します。 一般的には暗視野集光器が使用されますが、通常の集光器を使用して励起光が透過して試料にバイパスされるようにミラーを調整することもできます。 昔ながらの蛍光顕微鏡です。 メリットは低倍率で蛍光が強いこと、デメリットは倍率が上がると蛍光が弱くなることです。 したがって、より大きな試料材料の観察に適しています。
2. 落射蛍光顕微鏡 現代に開発された新しいタイプの蛍光顕微鏡です。 違いは、励起光が対物レンズから標本の表面に入射すること、つまり、照明コンデンサーと蛍光を収集するための対物レンズとして同じ対物レンズが使用されることです。 光ウランから 45 度離れた光路にダイクロイック ビーム スプリッターを追加する必要があります。 励起光は対物レンズに反射され、サンプル上に集光されます。 試料から発生した蛍光と対物レンズのレンズ面やカバーガラス面で反射した励起光は同時に対物レンズに入射し、2色ビームスプリッターに戻って励起光と蛍光を分離します。 、残留励起光はブロッキングフィルターによって吸収されます。 異なる励起フィルター/2色ビームスプリッター/ブロッキングフィルターの組み合わせに変更すれば、異なる蛍光反応生成物のニーズに対応できます。 この種の蛍光顕微鏡の利点は、視野の照明が均一で、画像が鮮明で、倍率が高くなるほど蛍光が強くなることです。
(2) 蛍光顕微鏡の使い方。
1. 光源をオンにします。超高圧水銀ランプが最も明るい点に達するまで、数分間ウォームアップする必要があります。
2. 透過型蛍光顕微鏡の場合、必要な励起フィルターを光源とコンデンサーの間に設置し、対応する遮断フィルターを対物レンズの後ろに設置する必要があります。 落射蛍光顕微鏡では、必要な励起フィルター/デュアル カラー ビーム スプリッター/ブロッキング フィルター インサートを光路のスロットに挿入する必要があります。
3. 低倍率レンズで観察し、光源の中心が照明スポット全体の中心に位置するように、各種蛍光顕微鏡の調整装置に合わせて調整します。
4. 標本シートを置き、焦点を合わせて観察します。 使用中に注意する必要があります。目を傷つけないように、エンドフィルターで直接観察しないでください。 オイルレンズで標本を観察する場合は、蛍光を含まない特殊なオイルレンズを使用する必要があります。 高圧水銀ランプは消灯後、すぐに再点灯することはできないため、テストが必要です。 5分後に再起動できますが、再起動しないと不安定になり、水銀ランプの寿命に影響を与えます。
(3) 観察 教育用プラットフォームの蛍光顕微鏡下で青紫光フィルターを使用すると、0.01 パーセントのアクリジン オレンジ蛍光色素で染色された細胞、核と細胞質が励起されて 2 つの異なる色を生成することがわかります。蛍光（濃い）緑とオレンジがかった赤）。
