微生物の染色技術と顕微鏡観察
細菌の簡単な染色
1 目的
1.1 微生物塗抹標本と染色の基本的な技術を学ぶ。
1.2 細菌の簡易染色法を習得する。
1.3 細菌の形態学的特徴を理解し、オイルミラーの使用と無菌操作技術の学習を強化する。
2 原理 細菌の塗抹標本と染色は、微生物学実験の基本的な技術です。細菌の細胞は小さくて透明で、通常の光学顕微鏡では認識しにくいため、染色する必要があります。単一の染料を使用して細菌を染色すると、染色された生物と背景が明確な色の違いを形成し、その形態と構造をより明確に観察できます。この方法は実行が簡単で、生物の一般的な形状と細菌の配置を観察するのに適しています。アルカリ染料は、中性、アルカリ性、または弱酸性の溶液では、細菌細胞は通常負に帯電し、アルカリ染料がイオン化されると、その分子の染色部分が正に帯電するため、アルカリ染料の染色部分が細菌に結合して細菌を着色しやすいため、単純染色によく使用されます。染色された細菌細胞は背景と鮮明にコントラストをなしており、顕微鏡で認識しやすくなります。単純染色によく使用される染料には、メロシアニンブルー、クリスタルバイオレット、塩基性化合物レッドなどがあります。 細菌が糖を分解して酸を生成し、培地の pH が低下すると、細菌の正電荷が増加し、赤、酸性赤、コンゴーレッドなどの酸性染料で染色できるようになります。 細菌は染色前に固定する必要があります。その目的は 2 つあります。1 つは細菌を殺してスライドに付着させることです。もう 1 つは染料に対する親和性を高めることです。一般的に使用される 2 つの方法は、加熱と化学固定です。固定するときは、細胞の元の形態を維持するようにしてください。
3 材料
3.1 菌株 Bacillus subtilis 12-18h 栄養寒天斜面培養、Staphylococcus aureus 約 24 時間栄養寒天斜面培養、Escherichia coli 24 時間栄養寒天斜面培養、パン酵母寒天斜面培養。
3.2 染色 ルーのアルカリ性メチレンブルー染色（またはシュウ酸アンモニウムクリスタルバイオレット染色）、石炭酸化合物赤色染色。
3.3 器具またはその他の用具 顕微鏡、アルコールランプ、スライド、接種リング、スライドホルダー、二重層ボトル（シダーオイルとキシレンを充填）、顕微鏡用紙、生理食塩水または蒸留水など。
4 手順 塗抹→乾燥→固定→染色→洗浄→乾燥→顕微鏡検査。
5つのステップ
5.1 塗抹標本 清潔でオイルフリーのスライドを 2 枚取り、無菌状態でスライドの中央に生理食塩水 (または蒸留水) を一滴ずつ置き、接種リングを使用して無菌操作で、それぞれ Bacillus subtilis、Garcinia micrococcus、Escherichia coli から斜めに小さなコケを一滴ずつ取り、水滴に混ぜてフィルムでコーティングします。細菌懸濁液 (または培養液) を塗抹標本にする場合は、リングを 2 ～ 3 個直接スライドに取り、接種リングとして使用できます。生理食塩水 (蒸留水) と細菌を塗りすぎると、厚くなりすぎ、均一に広がりすぎないことに注意してください。
5.2 乾燥 室温で自然乾燥させます。また、コーティング面を上にしてアルコールランプの上でわずかに加熱して乾燥させることもできます。ただし、炎に近づきすぎないようにしてください。温度が高すぎると、細菌の形態が破壊されます。
5.3 固定 熱乾燥を使用する場合、固定と乾燥は乾燥と同様に 1 つのステップにまとめられます。塗りつけ、乾燥し、熱固定します。
5.4 染色 スライドをスライド棚に平らに置き、塗抹標本に染色液を 1 ～ 2 滴垂らします (染色液は塗抹標本フィルムを覆う程度が適切です)。Lü の Basic Mellanox Blue で 1 ～ 2 分間染色し、Carbone Red (または Ammonium Oxalate Crystal Violet) で約 1 分間染色します。
5.5 すすぎ 染色液を流し出し、スライドの片方の端から水道水で、塗抹標本から流れ落ちる水が無色になるまで静かにすすぎます。すすぐときは、コーティングされた表面を洗うために水を直接流さないでください。塗抹標本の膜が剥がれないように、水流が速すぎたり、大きすぎたりしないようにしてください。
5.6 乾燥 スライド上の水滴を振り払って自然乾燥させるか、ドライヤーで乾かすか、吸水紙を使用して吸収乾燥させます (細菌体を拭き取らないように注意してください)。 5.7 顕微鏡検査 塗抹標本を乾燥させ、顕微鏡で検査します。油性顕微鏡で観察する前に、塗抹標本は完全に乾燥している必要があります。
6 結果 単一染色後の E. coli と Micrococcus garciniae の形態を描きます。
グラム染色
1。目的
1.1 グラム染色の原理と細菌の分類と同定におけるその重要性を理解する。
1.2 グラム染色技術を習得し、光学顕微鏡のオイルレンズの使用方法の学習を強化する。
