蛍光顕微鏡には、光の経路に基づいて 2 つのタイプがあります。
1. 透過型蛍光顕微鏡:励起光源がコンデンサーを介して標本材料を通過し、蛍光を励起します。暗視野コレクターが一般的に使用されますが、通常のコレクターを使用することもできます。反射鏡を調整して、励起光を試料に迂回させて側面から照射します。これは古い蛍光顕微鏡です。利点は、低倍率で蛍光が強いことですが、欠点は、倍率が高くなるにつれて蛍光が弱くなることです。したがって、より大きな標本材料を観察するのに適しています。
2.落射蛍光顕微鏡は、現代に開発された新しいタイプの蛍光顕微鏡です。上記との違いは、励起光が対物レンズから試料表面に向かって下向きに落ちることです。つまり、同じ対物レンズが照明コンデンサーと蛍光を収集するための対物レンズとして使用されます。光路に2色ビームスプリッターを追加する必要があります。これは、光学ウランで45%の角度で、励起光が対物レンズに反射され、サンプルに集中します。サンプルによって生成された蛍光と、対物レンズ表面とカバーガラス表面で反射された励起光は、同時に対物レンズに入り、二色ビームスプリッターに戻るため、励起光は蛍光から分離され、残りの励起光はブロッキングフィルターによって吸収されます。異なる励起フィルター/ 2色ビームスプリッター/ブロッキングフィルターの組み合わせインサートを使用すると、異なる蛍光反応生成物のニーズを満たすことができます。この種の蛍光顕微鏡の利点は、視野が均一に照らされ、画像が鮮明で、倍率が高いほど蛍光が強くなることです。
(2)蛍光顕微鏡の使い方
1. 光源をオンにすると、超高圧水銀ランプは最も明るい状態になるまで数分間暖まる必要があります。
2. 透過型蛍光顕微鏡では、光源とコンデンサーの間に必要な励起フィルターを設置し、対応するブロッキングフィルターを対物レンズの後ろに設置する必要があります。落射蛍光顕微鏡では、必要な励起フィルター/2色ビームスプリッター/ブロッキングフィルターインサートを光路のスロットに挿入する必要があります。
3. 低倍率の顕微鏡を使用して観察し、さまざまなモデルの蛍光顕微鏡の調整装置に従って光源の中心を調整し、照明スポット全体の中心に光源が位置するようにします。
4. 標本片を置き、焦点を調整して観察します。使用中は注意してください:目の損傷を避けるために、フィルターを目で直接観察しないでください。オイルレンズで標本を観察する場合は、専用の非蛍光オイルレンズを使用する必要があります。高圧水銀ランプは、電源を切った後すぐに再起動することはできません。5分後に再起動できます。そうしないと、不安定になり、水銀ランプの寿命に影響を与えます。
(3)青紫色光フィルターを用いて、教壇上の蛍光顕微鏡で観察する。通過がoであることがわかる。0.1%アクリジンオレンジ蛍光染料で染色された細胞では、核と細胞質が励起され、2つの異なる色の蛍光(濃い緑色とオレンジがかった赤色)を生成する。
