蛍光顕微鏡には、光路の違いにより 2 種類あります。
1. 透過型蛍光顕微鏡: 励起光源はコンデンサーミラーを通して試料材料を透過し、蛍光を刺激します。一般的に使用される暗視野コレクターですが、通常のコレクターも使用でき、反射鏡を調整して励起光が透過し、試料にバイパスされるようにします。これは古いタイプの蛍光顕微鏡です。利点は、低倍率で蛍光が強くなることですが、欠点は、倍率が上がるにつれて蛍光が弱くなることです。そのため、より大きな試料材料を観察する方が適しています。
2. 落下型蛍光顕微鏡 これは最近開発された新しいタイプの蛍光顕微鏡であり、違いは励起光が対物レンズから試料の表面まで降り注ぐことです。つまり、同じ対物レンズが照明集光器と蛍光対物レンズの収集を行います。光路には 2 色ビームセパレーターを追加する必要があります。これは光と 45 度の角度で、励起光は対物レンズに反射され、サンプルに集められます。サンプルと対物レンズの表面で生成された蛍光は、カバーガラスの表面で同時に対物レンズに反射され、2 色ビームセパレーターに戻ります。これにより、励起光と蛍光が残りの励起光から分離され、ブロッキングフィルターによって吸収されます。異なる励起フィルター / 2 色ビームセパレーター / ブロッキングフィルターの組み合わせブロックを変更すると、異なる蛍光反応生成物のニーズを満たすことができます。この蛍光顕微鏡の利点は、視野が均一で、画像が鮮明で、倍率が高いほど蛍光が強くなることです。
(B)蛍光顕微鏡法。
1.光源を開き、超高圧水銀ランプを数分間予熱して最も明るい点に到達させます。
2. 透過型蛍光顕微鏡は、光源とフィルターを刺激するために必要な集光器の間に、対応するブロッキング フィルターを備えた対物レンズの背面に設置する必要があります。落下型蛍光顕微鏡は、必要な励起フィルター/2 色ビーム セパレーター/ブロッキング フィルター インサートの光路のスロットに挿入する必要があります。
3. 低倍率レンズで観察し、蛍光顕微鏡のさまざまなモデルの調整装置に従って、光源の中心が照明スポット全体の中心に位置するように調整します。
4. 標本片を置き、焦点を合わせて観察します。使用上の注意: フィルターの取り付け後は、直接目で観察しないでください。目の損傷を引き起こしません。オイルミラーを使用して標本を観察する場合は、専用の非蛍光オイルミラーを使用する必要があります。高圧水銀ランプは、ランプを閉じた後すぐに再度開くことはできません。5分待ってから再度開始する必要があります。そうしないと、不安定になり、水銀ランプの寿命に影響します。
(C) 観察 青紫色光フィルターを備えた指導ステージ上の蛍光顕微鏡下では、0.01%のアミジンオレンジ蛍光染料で染色された細胞が見え、細胞の核と細胞質が励起されて2つの異なる蛍光色(濃い緑色とオレンジがかった赤色)が生成されます。
