偏光顕微鏡の偏光子を校正するための標準手順
蛍光顕微鏡は、通常の光学顕微鏡とは異なり、通常の光源を照射して標本を観察するわけではありません。代わりに、特定の波長の光（通常は紫外光、青紫光）を使用して、顕微鏡下で標本内の蛍光物質を励起し、蛍光を発させます。したがって、蛍光顕微鏡における光源の役割は直接照明ではなく、標本内部の蛍光物質を励起するエネルギー源としての役割となります。私たちが標本を観察できるのは、光源の照射によるものではなく、標本内部の蛍光物質が励起光のエネルギーを吸収して発する蛍光現象によるものです。このことから、蛍光顕微鏡の主な特徴は、その光源が特定の波長範囲の励起光を大量に供給できることで、標本中の蛍光物質が必要な励起光強度を得ることができることであることがわかります。同時に、蛍光顕微鏡には対応するフィルターシステムが必要です。蛍光顕微鏡は、蛍光組織化学の基本的なツールです。超高圧光源、フィルターシステム（励起および抑制フィルタープレートを含む）、光学システム、撮影システムなどの主要コンポーネントで構成されます。特定の波長の光を使用して標本を励起し、蛍光を発します。
1. 蛍光励起方式：光の波長範囲により、UV励起法（紫外線照明を使用）とBV励起法（青紫光を使用）の2種類があります。 UV励起法は400nmより短い近紫外光を励起に使用します。この方法では可視励起光が存在しないため、観察される蛍光は色素本来の蛍光を示し、標本上の特異的な蛍光と背景組織の自家蛍光を区別することが容易になります。
2. BV励起法：404nmと434nmを中心とした紫外光から青色光までの励起を伴います。この方法では青色光を使用して標本を照射するため、蛍光観察システムのカットフィルターには、青色光を完全に遮断し、必要な緑色と黄色の蛍光を完全に透過できるフィルターを使用する必要があります。-蛍光抗体法に使用される蛍光色素。励起光の最大吸収波長と蛍光の最大発光波長は比較的近いため、BV励起法で使用するフィルターにはシャープカットフィルターを使用する必要があります。この方式は青色光を励起光として利用できるため、蛍光色素の吸収効率が高く、より明るい画像が得られます。欠点は、500nm 未満の蛍光は見えないのに対し、500nm を超える蛍光では画像全体が黄色く見えることです。蛍光抗体法では、特異性は蛍光色素特有の色で決まることが多いため、微妙な特異性を議論する際には、前述したBV励起法の欠点が大きく影響することが多いです。
